Puromycin 嘌呤霉素鹽酸鹽（pac基因篩選標(biāo)記）/蛋白合成抑制劑/慢病毒載體

搜索關(guān)鍵詞：

Puromycin 嘌呤霉素；Streptomyces alboniger 白黑鏈霉菌；Puromycin N-acetyl-transferaseGene Pac基因；選擇性抗生素；蛋白合成抑制劑；慢病毒載體；CRISPR/Cas9系統(tǒng)；CAS：58-58-2；

基本介紹：

1）抗微生物譜（Antimicrobial spectrum）：嘌呤霉素（Puromycin，CAS：58-58-2），來源于白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）代謝產(chǎn)物的一種氨基糖苷類抗生素，有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)，對(duì)抗酸桿菌的抑制活性相對(duì)較弱，但對(duì)革蘭氏陰性菌的抑制活性更弱。還能抑制原生生物、藻類、哺乳動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞的生長(zhǎng)，一般2天內(nèi)能殺死99%的細(xì)胞。

2）作用機(jī)制（Mode of action）：嘌呤霉素作為氨酰-tRNA分子3’末端的結(jié)構(gòu)類似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸肽鏈中，導(dǎo)致肽鏈合成的*終止，進(jìn)而阻止蛋白質(zhì)合成。

3）抗性產(chǎn)生機(jī)制（Mode of resistance）：對(duì)嘌呤霉素的抗性來自嘌呤霉素產(chǎn)生菌內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因，其表達(dá)產(chǎn)物嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（puromycin N-acetyl-transferase）可通過乙酰化嘌呤霉素使其失活。

常見應(yīng)用：

1）基因篩選用抗生素，用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶pac基因質(zhì)粒/載體的瞬轉(zhuǎn)或穩(wěn)轉(zhuǎn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞株，特別是慢病毒顆粒感染的細(xì)胞株；也用在CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)；

相關(guān)文獻(xiàn)：Zhang WW et al, CRISPR-Cas9-Mediated Genome Editing in Leishmania donovani. MBio. 2015 Jul 21; 6(4):e00861.

2）制備嘌呤霉素溶液以進(jìn)行嘌呤霉素敏感實(shí)驗(yàn)；

3）用作蛋白合成抑制劑，用來研究細(xì)胞分化中控制基因順序表達(dá)和協(xié)同表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。

4）抗腫瘤效應(yīng)和活性（Antitumor effect and activity）

5）抗病錐蟲活性（Antitrypansome Activity）

常見篩選濃度：

哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10 μg/ml，加濃度使用宿主細(xì)胞殺滅實(shí)驗(yàn)（殺滅曲線）來確定；

大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選敏感轉(zhuǎn)化菌株，使用濃度為100-125μg/ml。

以下是針對(duì)一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的篩選濃度：

基本特性：

1）化學(xué)名：3'-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3'-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2）同義名：Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3）CAS NO：58-58-2

4）分子式：C22H29N7O5·2HCl

5) 分子量：544.43 g/mol

6)  外觀：白色至灰白色粉末

7) 純度：＞98% (HPLC)

8)  熔點(diǎn)：175-177 °C

9) 溶解性：溶于水（50mg/ml），乙醇（~1mg/ml），DMSO（~10mg/ml），PBS，pH 7.2（~10mg/ml)

10) 化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

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Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素鹽酸鹽

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素鹽酸鹽