小鼠生長激素受體(GHR)ELISA檢測試劑盒兩種設定空白對照的方案:
(1)將 TMB 空白顯色孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去 TMB 空白顯色孔的 吸光值后,在坐標紙上畫出曲線,以吸光值作為縱坐標,以濃度作為橫坐標 。
(2)將零孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數據可以 直接在坐標紙上畫出曲線。
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ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啟發,提高試驗質量。
下面分析小鼠生長激素受體(GHR)ELISA檢測試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法
1 、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 、加樣
可能原因: 1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法: 1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。
3 、孵育
可能原因: 1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。
解決辦法: 1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 、洗板
可能原因: 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法: 1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 、顯色
可能原因: 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法: 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流; 3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 、終止
可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 、讀板
如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。深圳子科生物已經用于9年的技術研發經驗,能極大的保障每個消費者的售后技術服務,讓您買的放心,用的放心!
小鼠生長激素受體(GHR)ELISA檢測試劑盒Indoxyl-Gal 3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷 100mg 子科ZIKER
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Inosine 肌苷 100g 子科ZIKER
Inosine 5’-triphosphate trisodium salt 肌苷5’-三磷酸三鈉 250mg 子科ZIKER
Inosine 5’-triphosphate trisodium salt 肌苷5’-三磷酸三鈉 1g 子科ZIKER
INT dye 碘硝基四唑紫 1g 子科ZIKER
Iodine standard solution 碘標準溶液 (0.1M) 100ml 子科ZIKER
Iohexol 碘海醇 5g 子科ZIKER
Iohexol 碘海醇 25g 子科ZIKER
D-myo-Inositol 肌醇 100g 子科ZIKER
D-myo-Inositol 肌醇 500g 子科ZIKER
Inulin from chicory 菊粉 100g 子科ZIKER
Iodic acid 碘酸 100g 子科ZIKER
Iodine 碘 100g 子科ZIKER
Isoquercitrin 異槲皮苷 100mg 子科ZIKER
Isorhamnetin 異鼠李素 100mg 子科ZIKER
Isovanillin 異香草醛 50g 子科ZIKER
Janus Green B 健那綠 25g 子科ZIKER
Iodine bromide 一溴化碘 100g 子科ZIKER
Iodine chloride 一氯化碘 25g 子科ZIKER
Iodine pentoxide 五氧化二碘 25g 子科ZIKER
Iodine trichloride 三氯化碘 100g 子科ZIKER
Iodoacetamide 碘乙酰胺 5g 子科ZIKER
Iodoacetamide 碘乙酰胺 25g 子科ZIKER
Iodoacetamide 碘乙酰胺 5g 子科ZIKER
Iodoacetamide 碘乙酰胺 30g 子科ZIKER
Iodoacetic acid 碘乙酸 25g 子科ZIKER
Iodoacetic acid, sodium salt 碘乙酸鈉 5g 子科ZIKER
Iodoacetyl LC Biotin 100mg 子科ZIKER
Iodobenzene 碘代苯 10g 子科ZIKER
3-Iodobenzoic acid 3-碘苯甲酸 10g 子科ZIKER
4-Iodobenzoic acid 4-碘苯甲酸 10g 子科ZIKER
Lysostaphin 溶葡球菌酶, 1mg 子科ZIKER
5-Iodo-2’-deoxycytidine 5-碘 2’-脫氧胞苷 250mg 子科ZIKER
5-Iodo-2’-deoxycytidine 5-碘 2’-脫氧胞苷 1g 子科ZIKER
5-Iodo-2’-deoxyuridine 5-碘 2’-脫氧尿苷 1g 子科ZIKER
4-Iodophenoxyacetic acid 4-碘苯氧基乙酸 25g 子科ZIKER
4- 3-(4-Iodophenyl)-2-(2,4-dinitrophenyl)-2H-5-tetrazolio -1,3-benzenedisulfonate sodium salt 水性四氮唑-3 (2-(4-碘苯基)-3-(2,4-二硝基苯基)-5-苯基-3H-四唑鎓-2',4'-二磺酸鈉鹽) IPB 100mg 子科ZIKER