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細胞存活率檢測試劑盒Cell Viability Assay Kit現
細胞融合劑Cell Fusion Solution/子科生物現貨
細胞消化液Cell Dissociation Solution/100
細胞名稱:人結直腸癌細胞/HCT116細胞
生長特性:貼壁生長
運輸方式:凍存細胞,快遞干冰運輸;復蘇之后,常溫下運輸。
細胞來源:ATCC來源,國家工程細胞研究中心。
包裝:培養瓶加說明書。
細胞凍存:液氮凍存。
用途:提供用于科研研究,不得用于臨床檢測。
培養條件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養。
細胞數量:1× 106個
細胞傳代:1:4~1:6傳代;每周換液2~3次。
人結直腸癌細胞/HCT116細胞細胞復蘇:
1、打開水浴鍋, 預熱到37度
2、從液氮罐中出凍存的細胞,迅速放入37度水浴鍋快速溶解
3、在超凈臺中,把溶解的細胞移入離心管,(離心管內先加入2ML左右的培養基).1000RPM 離心5分鐘
4、棄上清,加入1ML培養基,吹打均勻,移入培養瓶內,(培養瓶內先加入4-5ML培養基),37度過5%CO2培養箱培養
5、第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
傳代:
1、當細胞融合度達到90%以上時,給細胞傳代;
2、37°C水浴預熱培養基;
3、在超凈臺中,棄培養基,加入2-5mlPBS清洗細胞后,再加入1ml胰酶消化細胞;
4、顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,加入5ml培養基終止消化;
5、用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打將細胞吹散;
6、將細胞移入離心管中,1000rpm離心5min;
7、棄上清,加入15-20ml的培養基(含血清)重懸細胞后轉入T75培養瓶中或按適當比例傳到T25瓶中(確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間),細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細胞懸液,確保細胞均勻分布;
8、將培養瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養箱中培養。
凍存:
1、將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2、準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配) 或95%FBS+5%DMSO(現用現配)
3、加1.5毫升凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘. 放入-20度冰箱1-3小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
4、原則:慢凍速溶
5、加1.5毫升凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
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