組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）
規(guī)格：50次 100次 200次
適用范圍：適用于快速提取各種動植物細(xì)胞/組織基因組DNA

保存周期：室溫儲存12個月

產(chǎn)品介紹：
*的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除， zui后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點：
1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2. 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3. 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
4. 多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長度可達(dá)30kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）操作步驟：
提示：*次使用前請先在漂洗液WB中加入量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1. 組織培養(yǎng)細(xì)胞
a. 收集約105-106懸浮細(xì)胞到一個1.5ml離心管；對于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先用胰蛋白酶消化后吹打下來收集。
b. 13,000rpm離心10秒，使細(xì)胞沉淀下來。棄上清，留下細(xì)胞團和大約10-20μl殘留的液體。
c. 加200μl 1XPBS重懸洗滌細(xì)胞，13,000rpm離心10秒，使細(xì)胞沉淀下來。*吸棄上清, 將細(xì)胞沉淀重懸于180μl 1XPBS中。
d. 加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混勻，再加入200μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在70℃放置10分鐘。
可選做步驟: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可以在加入200μl 結(jié)合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
e. 冷卻后加210μl無水乙醇或異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
f. 將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液。
g. 接操作步驟項下4。
2. 動植物組織（例如鼠肝腦或者植物葉片）
a. 新鮮或者解凍的組織在液氮中研磨成細(xì)粉后或者用解剖刀切成小碎塊（切成微塊可以提高產(chǎn)量）后取20-50mg，轉(zhuǎn)入裝有180μl組織裂解液TL的1.5ml離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c. 將裂解物放置在55℃水浴1-3小時或者直到組織消化*，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。
可選做步驟: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可在完成步驟c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
d. 加入200μl 結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。
e. 冷卻后加210μl無水乙醇或 異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
f. 用1ml的槍頭吸取混合物，將混合物加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液。
    如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去，該做法是為了去除不溶物，以免堵塞離心柱。
g. 接操作步驟項下4。
3. 動物組織（鼠尾）
a. 將0.2-0.5cm的鼠尾巴尖(即20-50mg)剪碎（一定要剪0-2cm范圍內(nèi)的尾巴尖，否則裂解效果不好），或者在液氮中研磨組織成細(xì)粉后，轉(zhuǎn)入裝有180μl組織裂解液TL的1.5ml離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b. 加入20μl的蛋白酶K(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c. 將裂解物放置在55℃水浴3小時或者直到組織消化*，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。
可選做步驟: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可在完成步驟c后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
d. 用一個1ml不帶針頭的一次性輸液器抽打裂解物2-3次，如果固體物質(zhì)較多，可12,000rpm離心60秒，取上清。
e. 加入200μl 結(jié)合液CB和210μl無水乙醇或 異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。
f. 將上清加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。
g. 接操作步驟項下4。
上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴(yán)重降低產(chǎn)量，必要時如樣品粘稠不易混勻時可以渦旋振蕩15秒混勻。
4. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。
5. 加入500μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
6. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
8. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是zui小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
9. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

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