豚鼠腦源性神經營養因子(BDNF) ELISA Kit?品牌：子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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豚鼠腦源性神經營養因子(BDNF) ELISA Kit標本的處理 
可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、 細胞培養上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定，有些 則需經預處理。 
● 血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。收集上清。如 有沉淀形成，應再次離心。 
● 血漿： 
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形 成，應再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液： 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成， 應再次離心。
●細胞培養上清：
 檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集 上清。檢測細胞內的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 
●細胞： 
檢測細胞的成份時，對于貼壁細胞，去除培養液，用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后，細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上 清，即可進行后續操作。 
●組織標本： 
切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

豚鼠腦源性神經營養因子(BDNF) ELISA Kit操作步驟
1、 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2、 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6、將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10、20-25℃下避光反應15分鐘；
11、各孔加入50μl終止液，終止反應；

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