小鼠抗增殖細胞核抗原抗體（PCNA）ELISA試劑盒●品牌：子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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小鼠抗增殖細胞核抗原抗體（PCNA）ELISA試劑盒在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性問題，子科生物技術部根據多年研發和臨床經驗總結如下：
1、試劑盒特異性因素 
1）固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板zui為常見[1]。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各產品的質量差異很大。因此，在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證，評估。 
2）包被物的純度。在酶聯免疫測定尤其是間接ELISA中，試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術條件的限制，包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%，所以有些非特異性顯色不可避免，只能盡可能提高純度，提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。 
3）包被抗體的效價。具有高親和力和高特異性的包被抗體，是決定試劑特異性的重要方面。 
4 ）封閉。是ELISA中重要的一步，目的是封閉固相載體表面尚未被所占據的空隙[2]，減少后續步驟中非特異性蛋白的干擾。 
2、操作過程中的問題造成假陽性 
1）加樣 
對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋，如果加樣不準就會造成誤差，尤其當稀釋倍數大時，很小的誤差，會導致較大的相對誤差，使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統處理標本，可較好地避免以上誤差。 
2）洗滌 
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步，應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關，ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。 
3） 溫育 
每種試劑都有其佳反應模式，其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時間長，會造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發，板上應加蓋。 
4）酶標儀判讀 
作為記錄測定結果的儀器，酶標儀的性能穩定與否，決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養，對濾光片要定期校正；其次酶標儀波長設置要正確，使用雙波長，一個檢測波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同。 

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