小鼠內皮型一氧化氮合成酶（eNOS）ELISA試劑盒●品牌：子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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小鼠內皮型一氧化氮合成酶（eNOS）ELISA試劑盒血清樣本采集和檢測注意事項：
血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清
融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。

實驗測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數=樣品數+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標板加上蓋，37℃反應 90 分鐘。 
4．反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍色立轉黃色。 
11．用酶標儀在 450nm 測定 OD值。

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