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大鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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大鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標板加上蓋,37℃反應 90 分鐘。
4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體;或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應 20-25 分鐘 (注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標儀在 450nm 測定 OD值。
注意:客戶收到我公司產(chǎn)品請*時間確認試劑盒是否有破損,酶標板是否封閉,使用前 TMB顯色液應為無色透明溶液,若發(fā)現(xiàn)顏色異常,或者其他問題請及時與我司售后人員進行,我們會*次安排進行退換。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,底物請避光保存。使用之后所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,以免造成污染!
用于標記ELISA試劑盒里抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:
1、有高度的活性和敏感性;
2、在室溫下穩(wěn)定;
3、反應產(chǎn)物易于顯現(xiàn);
4、能商品化生產(chǎn)。
當前應用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應用zui廣。
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