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大鼠鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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預期應用:ELISA法定量測定相關血清、血漿或其它相關液體中的含量/活性。
大鼠鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒●標本的采集及保存:
1.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
大鼠鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒●操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,輕輕混勻,酶標板加上蓋,37℃反應120分鐘。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯)。
6. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時蘭色立轉黃色)。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
●注:1.每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
2.為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內。
●洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
●特異性:本試劑盒可同時檢測改指標,且與其它相關蛋白無交叉反應。
●計算:以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
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