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大鼠玻連蛋白(VTN)ELISA試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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大鼠玻連蛋白(VTN)ELISA試劑盒的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應,并通過酶催化底物發生化學變化將抗原抗體反應通過顏色的形式顯現出來。
(1)將抗原抗體反應固相化:即試驗中的包被環節,使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結構,保持其生物學特性和免疫學活性;
(2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應的特異性,因此,包被剩余的固相表面應該用抗原抗體反應無關蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
(3)抗原抗體反應:抗原或抗體在適當的介質下可進行特異的抗原抗體反應。 (4)酶反應:酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結合物,當抗原抗體反應的時候,被檢測靶目標中也結合了酶分子。
(5)ELISA試劑盒底物反應:結合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發生顏色反應,檢測人員可以裸眼觀察,可以通過顏色來判定是否有免疫反應的存在,通過顏色的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量,也可借用酶標儀在適當的波長讀取吸光度值。
大鼠玻連蛋白(VTN)ELISA試劑盒注意事項:
●每個標本量收集體積= 100ul × 檢測種類,如要做復孔,標本量收集體積= 100ul × 檢測 種類×2 。
● 對于作某一個具體指標來說,先用一系列稀釋度作一批標本測定,得出對實驗有意義 的一個稀釋度(即測定劑量反應曲線),然后用一個zui適稀釋度測定即可。
● 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在 4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條 件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度 可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
● 血清標本采集時,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質, 以 HRP 為標記的 ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
●為了保證尿液檢測結果的準確性,必須正確收集尿液標本和保存。盛尿容器要清潔干燥。 使用一次性的容器(如塑料尿杯),避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染,影響檢 測結果。尿液標本必須新鮮,留取后,應及時檢測或保存,以免細菌繁殖。因在室溫中久 置后(尤其是夏季)尿中磷酸鹽等可析出結晶而干擾檢測。
● 標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性 HRP,也會產生假陽性反應。 保存過久可發生聚合在 ELISA 中可使本底加深。
● 凍結標本融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛 倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。
● 混濁或有沉淀的標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
● 反復凍融會使蛋白效價降低,所以待測標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。也可 加入適當防腐劑。
● 如果您在實驗中遇到任何特殊問題,敬請咨詢我公司深圳子科生物技術部。
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