小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒標本的處理方法

可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、 細胞培養(yǎng)上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定，有些 則需經(jīng)預處理。 
● 血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。收集上清。如 有沉淀形成，應再次離心。 
● 血漿： 
應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形 成，應再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液： 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成， 應再次離心。
●細胞培養(yǎng)上清：
 檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集 上清。檢測細胞內的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 
●細胞： 
檢測細胞的成份時，對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后，細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上 清，即可進行后續(xù)操作。 
●組織標本： 
切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒實驗測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標板加上蓋，37℃反應 90 分鐘。 
4．反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍色立轉黃色。 
11．用酶標儀在 450nm 測定 OD值。

小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒7.5%氯化鈉肉湯    250g/瓶
無菌 7.5%氯化鈉肉湯    225ml×20 瓶/箱
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯    250g/瓶
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯    225ml×20 瓶/箱
磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    250g/瓶
無菌磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    225ml×20 瓶/箱
無菌磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    9ml×20 支/箱
無菌生理鹽水    225ml×20 瓶/箱
無菌生理鹽水    9ml×20 支/箱
豆粉瓊脂    250g/瓶
無菌脫纖維綿羊血    100ml/瓶
ZIKERird-Parker 瓊脂基礎    250g/瓶
亞碲酸鉀卵黃增菌液    5ml×10 支/盒
ZIKERird-Parker 瓊脂平板    90mm×10 個/包
革蘭氏染色液    10ml×4 支/盒
腦心浸出液肉湯（BHI）    250g/瓶
無菌腦心浸出液肉湯（BHI）    5ml×10 支/盒
兔血漿（檸檬酸鈉）    0.5ml×10 支/盒
營養(yǎng)瓊脂（NA）    250g/瓶
營養(yǎng)瓊脂小斜面    4ml×10 支/盒
腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基（不含瓊脂）    250 g/瓶