小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒標本的處理方法
可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細胞培養上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定,有些 則需經預處理。
● 血清:
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應再次離心。
● 血漿:
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。
●尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成, 應再次離心。
●細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
●細胞:
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養液,用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后,細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進行后續操作。
●組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒實驗測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數=樣品數+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標板加上蓋,37℃反應 90 分鐘。
4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應 20-25 分鐘 (注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時藍色立轉黃色。
11.用酶標儀在 450nm 測定 OD值。
小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測試劑盒7.5%氯化鈉肉湯 250g/瓶
無菌 7.5%氯化鈉肉湯 225ml×20 瓶/箱
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 250g/瓶
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 225ml×20 瓶/箱
磷酸鹽緩沖液(pH7.2) 250g/瓶
無菌磷酸鹽緩沖液(pH7.2) 225ml×20 瓶/箱
無菌磷酸鹽緩沖液(pH7.2) 9ml×20 支/箱
無菌生理鹽水 225ml×20 瓶/箱
無菌生理鹽水 9ml×20 支/箱
豆粉瓊脂 250g/瓶
無菌脫纖維綿羊血 100ml/瓶
ZIKERird-Parker 瓊脂基礎 250g/瓶
亞碲酸鉀卵黃增菌液 5ml×10 支/盒
ZIKERird-Parker 瓊脂平板 90mm×10 個/包
革蘭氏染色液 10ml×4 支/盒
腦心浸出液肉湯(BHI) 250g/瓶
無菌腦心浸出液肉湯(BHI) 5ml×10 支/盒
兔血漿(檸檬酸鈉) 0.5ml×10 支/盒
營養瓊脂(NA) 250g/瓶
營養瓊脂小斜面 4ml×10 支/盒
腸毒素產毒培養基(不含瓊脂) 250 g/瓶