小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的處理方法

可用作 ELISA 測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、 細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定，有些 則需經(jīng)預(yù)處理。 
● 血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清。如 有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
● 血漿： 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液： 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成， 應(yīng)再次離心。
●細(xì)胞培養(yǎng)上清：
 檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集 上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
●細(xì)胞： 
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí)，對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10 秒后，細(xì)胞 就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉 淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上 清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。 
●組織標(biāo)本： 
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟：
1．確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時(shí)間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。

小鼠Vasorin蛋白(VASN)ELISA檢測(cè)試劑盒7.5%氯化鈉肉湯    250g/瓶
無菌 7.5%氯化鈉肉湯    225ml×20 瓶/箱
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯    250g/瓶
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯    225ml×20 瓶/箱
磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    250g/瓶
無菌磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    225ml×20 瓶/箱
無菌磷酸鹽緩沖液（pH7.2）    9ml×20 支/箱
無菌生理鹽水    225ml×20 瓶/箱
無菌生理鹽水    9ml×20 支/箱
豆粉瓊脂    250g/瓶
無菌脫纖維綿羊血    100ml/瓶
ZIKERird-Parker 瓊脂基礎(chǔ)    250g/瓶
亞碲酸鉀卵黃增菌液    5ml×10 支/盒
ZIKERird-Parker 瓊脂平板    90mm×10 個(gè)/包
革蘭氏染色液    10ml×4 支/盒
腦心浸出液肉湯（BHI）    250g/瓶
無菌腦心浸出液肉湯（BHI）    5ml×10 支/盒
兔血漿（檸檬酸鈉）    0.5ml×10 支/盒
營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）    250g/瓶
營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面    4ml×10 支/盒
腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基（不含瓊脂）    250 g/瓶