人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒ELISA試劑盒操作過程主要步驟總結如下:
稀釋--加樣--溫育--配液--洗滌--加酶--溫育--洗滌--顯色--終止--測定
結果判斷與分析:
1、 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的LTB4標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的LTB4含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒ELISA試劑盒實驗原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過了夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒ELISA試劑盒操作步驟
1、 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2、 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)
6、將酶標板用封口膠密封后,37℃孵育反應 1小時;(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標板洗滌后用吸水紙*拍干;
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)
10、各孔加入50μl終止液,終止反應;10、20-25℃下避光反應15分鐘;
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