小鼠脂肪型脂肪酸結合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒

●用途： For research use only. Not for diagnostic use.
●特點：靈敏性高、特異性強、重復性好
●服務：子科生物所有的elisa試劑盒均可免費代測，全程Elisa實驗技術指導。
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小鼠脂肪型脂肪酸結合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒

一般的生物標本包括有：
血液、體液、內臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達系統的表達產物等，一般為無菌操作，低溫保存(-80℃、液氮)。
一．如果采集的實質器官則要求：
1、 器官實質不能太小
2、 以采集實質性病灶區為佳：如淋巴結、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器，并做好標記
4、 應在0-8℃的低溫儲存和運輸
5、 實質性器官的處理：
5.1、取實質性器官約0.5mg左右，充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水，充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min，去上清
5.4、-20℃保存，作為待檢標本(切勿反復凍融)
二．體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清，它們的主要區別就是：血清凝血而血漿不凝血，所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽)，采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
1.2、如要采集血清，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
2、胃液和唾液的采集方式一般現采現用，但是一般飯后半小時內不易采集，因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，的采集的時間時空腹采集；
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現采現用，但是一般隔夜尿不采集；
4、組織提取液如肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保存備用；
三、糞便以及天然孔排泄物：采集后一般現用/生鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存備用；
四、活檢組織一般進行穿刺檢測，zui常見的就是肝活檢，像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準確。
五、表達產物的檢測
(一)真核表達產物
1、 細胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細胞或半貼壁，直接將細胞培養上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
1.2、不貼壁細胞，將培養基和細胞轉移至10ml離心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
2、 細胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細胞或半貼壁，直接將細胞培養上清吸出，然后用001M (pH 7.4)將細胞吹下至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀轉移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
2.2、不貼壁細胞，將培養基和細胞轉移至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01M (pH 7.4)重懸，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
(二)原核(大腸桿菌表達系統)表達產物
1、表達上清(非融合性蛋白)
直接將培養物和上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養物和上清吸出，10000rmp x10min，棄上清，沉淀用洗一遍，500-800rmp x10min，棄上清，DDW重懸沉淀，冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；

小鼠脂肪型脂肪酸結合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應；

結果判斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值；
2. 以OD值為縱坐標，以標準品的濃度為橫坐標，繪制曲線圖；
3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍；

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