Western Blot試劑的準(zhǔn)備配方大全:

1. 30%儲(chǔ)備膠溶液： 丙烯酰胺(Acr) 29.0g 亞甲雙丙烯酰胺(Bis) 1.0g 混勻后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室溫。

2. 4×分離膠緩沖液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解，濃鹽酸調(diào)PH 8.8，定容至100ml。

3. 4×濃縮膠緩沖液(0.5mol/L Tris-HCl PH 6. 8) Tris 12.1g加ddH2O溶解，濃鹽酸調(diào)PH 6. 8，定容至100ml。

4. 10%SDS：電泳級SDS 10.0g加ddH2O，68℃助溶，濃鹽酸調(diào)PH 7.2，定容至100ml。

5. 5×電泳緩沖液(PH 8.3)： Tris 15.2g 甘氨酸 94g ddH2O 定容到1000ml SDS 5g 先在974ml蒸餾水中加入Tris堿，待溶解*后，再加甘氨酸，zui后加SDS。

6. 10%過硫酸銨(AP)：0.1g AP加ddH2O至1.0ml，4℃保存，要在一周內(nèi)使用，新鮮配制。

7. 2×加樣緩沖液：2×SDS加樣緩沖液 0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8) 2ml 10%SDS 4 ml β-巰基乙醇 1ml 甘油 2ml 1%溴芬藍(lán) 1ml 置4℃避光保存

8. TEMED：注意室溫較低時(shí)TEMED量可加倍，zui后灌膠之前再用

9. 轉(zhuǎn)膜緩沖液(Towbin transfer Buffer)： 即1×SDS-PAGE

10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) ： NaCl 8.5g (12H2O)Na2HPO4 2.9011g (2H2O)NH2PO4 0.24g 加ddH2O定容至 1000ml

11. 封閉液: 1×PBS中加入 30ml 5%(V/V)脫脂奶粉 1.5g 0.02%疊氮鈉 0.006g 0.05%Tween-20 0.015g

12. 漂洗液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS溶液 每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20

13. 水飽和正丁醇： 正丁醇 50 ml ddH2O 5 ml 加入瓶中震蕩，使結(jié)合，存于室溫。 用時(shí)取上面一相加在凝膠上面。

14. 考馬斯亮藍(lán)染色法試劑：一般用G250考馬斯亮藍(lán)(蛋白定量)染色液： 90 ml甲醇：水(1：1，V/V)和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250馬斯亮藍(lán)0.25g，用Whatman 1號濾紙過濾染液以去除顆粒狀物質(zhì)。(染色液多次回收利用) 脫色液：90 ml甲醇：水(1：1，V/V)和10 ml冰乙酸的混合液

15. 麗春紅S染色色法試劑：2%乙酸， 0.5%麗春紅的水溶液 脫色液：TBS

16. Aprotinin:為一58氨基堿性多肽，經(jīng)反復(fù)凍融后，會(huì)發(fā)生集聚，儲(chǔ)存液應(yīng)分裝成小份，保存于-20度，每一小份用后應(yīng)予廢棄。

17. PMSF：在溶液中不穩(wěn)定，應(yīng)在臨用前從儲(chǔ)存液中現(xiàn)加于裂解液中。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量的水沖洗。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF通常配成10mmol/L濃度儲(chǔ)液(1.74或17.4mg/ml溶于異丙醇中)保存于-20度。

18. 顯色液：聯(lián)苯胺顯色液(DAB) DAB 2ml 10%H2O2 60μl PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml

19. 三去污裂解緩沖液 0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml0.15mol/L NaCl 0.8775 g/100ml 0.02%疊氮鈉 0.02 g/100ml0.1%SDS 0.1 g/100ml

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