小分子抗原現(xiàn)在做的zui多的是農(nóng)yao和獸藥，這方面的文獻(xiàn)也很多。以前查過一些材料，作者覺得小分子抗原能否制備出高性能的單克隆抗體主要以下幾點(diǎn)決定。
1、對(duì)于半抗原結(jié)構(gòu)的選擇，如果待測(cè)物本身含有NH2，COOH，OH等活性基團(tuán)，可以利用待測(cè)物活性基團(tuán)加入間隔臂，然后聯(lián)入載體蛋白就可以成功合成人工抗原，制備特異性良好的抗體。
但大部分待測(cè)物上并不含有活性基團(tuán)或活性基團(tuán)對(duì)藥物的特異性和極性影響很大，所以大部分用于人工抗原合成的半抗原要經(jīng)過改造或從頭合成。例如在關(guān)于有機(jī)磷農(nóng)yao倍硫磷的免疫檢測(cè)方法的研究中，半抗原物的獲得采用的合成方法并不是從倍硫磷開始合成，而是采用另一途徑，從起始物重新合成，這樣反而能取得較好的效果，這一點(diǎn)對(duì)于制備具有多殘留檢測(cè)能力的抗體來說更為重要，只需合成出幾種待測(cè)藥物共有的結(jié)構(gòu)就有可能制備出具有多殘留檢測(cè)能力的抗體。（Yoo Jung Kima，2003）
2、待測(cè)物本身的結(jié)構(gòu)有時(shí)對(duì)建立方法的性能有很重要的影響，在分子量在111－1202Da的化合物制備的單克隆抗體的親和系數(shù)的試驗(yàn)中，半抗原的分子量在334–374Da之間時(shí)，制備的單克隆抗體具有很高的親和系數(shù)。但當(dāng)要檢測(cè)的小分子化合物的分子量小于300Da時(shí)，產(chǎn)生具有良好靈敏度和特異性單克隆抗體的可能性下降（Chappey et al.，1994）。這說明藥物的分子量是影響抗體性能的重要因素。同時(shí)待測(cè)物的結(jié)構(gòu)對(duì)于制備人工抗原的難易程度有重要影響，有些半抗原經(jīng)過理論分析能制備出高質(zhì)量的抗體，但從化學(xué)合成的角度，這些化合物可能是合成不出來的或工藝過于復(fù)雜，所以半抗原結(jié)構(gòu)能否合成出來，也是半抗原結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)過程中要考慮的問題。
3、如果待測(cè)物結(jié)構(gòu)過于簡(jiǎn)單，可能也是不能建立免疫檢測(cè)方法的。待測(cè)物的結(jié)構(gòu)含有特征性的環(huán)狀結(jié)構(gòu)或側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，甚至含有雜原子，都能夠增加制備出高質(zhì)量抗體的可能性。在對(duì)脂肪酸類物質(zhì)制備抗體的試驗(yàn)中，對(duì)于脂肪酸類物質(zhì)來說，如果含有兩個(gè)以上的羰基，及與蛋白偶聯(lián)之后還有多余的羰基增強(qiáng)親水性，同時(shí)酰基的不飽和雙鍵和極性的頭部結(jié)構(gòu)都可以做為B細(xì)胞的抗原決定簇，可以將其他抗原性很弱的部分變成強(qiáng)抗原性。再者如果脂肪酸含有平面結(jié)構(gòu)，也可以作為抗原決定表位，使產(chǎn)生特異性的抗體。這說明小分子的極性以及不飽和鍵，苯環(huán)結(jié)構(gòu)都可以增強(qiáng)抗原性，簡(jiǎn)單的直鏈結(jié)構(gòu)很難產(chǎn)生特異性很強(qiáng)的抗體，這也是一般選用直鏈作為間隔臂的原因。直鏈碳鏈本身的抗原決定性很差，不會(huì)產(chǎn)生針對(duì)間隔臂的抗體。
4、合成人工抗原的過程中，即使半抗原絕大部分的官能團(tuán)與待測(cè)物都是一致的，它也可能在聯(lián)入蛋白載體的過程中受到屏蔽作用。小分子藥物在與載體蛋白連接的部位很容易受到屏蔽。從而產(chǎn)生的抗體就會(huì)喪失對(duì)那些屏蔽基團(tuán)的特異性。確定半抗原不受蛋白的屏蔽作用在人工抗原合成中非常重要，解決這一問題的*方法就是聯(lián)入間隔臂。
5、間隔臂的連接位點(diǎn)的選擇對(duì)于抗體質(zhì)量至關(guān)重要，不要影響小分子化合物中特征性的基團(tuán)暴露于免疫B細(xì)胞的抗原表位，這也是待測(cè)物本身的羧基，氨基一般不能直接聯(lián)入間隔臂，因?yàn)檫@些基團(tuán)對(duì)小分子藥物的電性和極性影響非常大。而且引入的間隔臂不能影響主要基團(tuán)的電子分布，例如苯環(huán)和其他雜環(huán)類的電子分布，這就要求間隔臂的極性和能量要低，將對(duì)小分子藥物的電子排布和空間結(jié)構(gòu)的影響降到zui低，從這個(gè)角度來說，低能量的直鏈間隔臂是*的選擇。聯(lián)入間隔臂的半抗原的電子分布與目標(biāo)待測(cè)物的電子特性一致性對(duì)抗體針對(duì)待測(cè)物的特異性至關(guān)重要。
6、半抗原間隔臂的連接位點(diǎn)，選擇極性較低且遠(yuǎn)離半抗原的特征性結(jié)構(gòu)。如果待測(cè)物的極性較高，半抗原合成的過程中保持其與目標(biāo)待測(cè)物極性的一致性。人工抗原具有較高的極性，對(duì)于引發(fā)免疫反應(yīng)有重要作用。在結(jié)構(gòu)3Bentazon的抗體制備過程中，有三個(gè)介入位點(diǎn)。異丙基遠(yuǎn)離雜環(huán)，是聯(lián)入間隔臂的理想位點(diǎn)，可以zui小程度的改變待測(cè)物的物理和化學(xué)特性。但異丙基是這物質(zhì)的特異性基團(tuán)，對(duì)于保證制備抗體的特異性很重要，所以不能選擇這個(gè)位點(diǎn)。
7、Bentason II位的亞氨基具有很強(qiáng)的極性，如果間隔臂聯(lián)入這個(gè)位點(diǎn)極性將會(huì)消失。這種化合物的衍生物大多為非極性，如果要制備多殘留的抗體，增加交叉反應(yīng)率，這個(gè)位點(diǎn)將是理想的間隔臂介入位點(diǎn)。但對(duì)特異性要求高的抗體制備，就必須要保證半抗原的極性，所以對(duì)于高特異性的抗體制備來說，這一位點(diǎn)也不適合連入間隔臂。在 III位介入直鏈的間隔臂，可以保證與待測(cè)物極性的一致，而且中性的多甲基直鏈對(duì)雜環(huán)的電子排布影響也較小。試驗(yàn)結(jié)果顯示II，III聯(lián)入間隔臂制備的抗體對(duì)Bentason的靈敏度很差，但是對(duì)II位氨基衍生的樣品的靈敏度高于目標(biāo)待測(cè)物，說明衍生物的非極性是靈敏度高于原形Bentason的原因。這也與MQCA抗體對(duì)原型藥物識(shí)別能力較差，但對(duì)丁胺衍生后的樣品具有高靈敏度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。說明半抗原與待測(cè)藥物電荷狀態(tài)的一致性，在這些極性很強(qiáng)的藥物小分子免疫殘留檢測(cè)方法中要重點(diǎn)考慮。但I(xiàn)II位接入間隔臂的人工抗原制備的抗體的靈敏度與預(yù)期不一致，這可能因?yàn)樵買II位聯(lián)入間隔臂時(shí)，間隔臂上面自由的羧酸基團(tuán)可能與II位自由的氨基發(fā)生偶聯(lián)，所以III位聯(lián)入間隔臂的人工抗原的極性與目標(biāo)待測(cè)物不一致，這也是抗體對(duì)目標(biāo)待測(cè)物識(shí)別能力較差的原因。

（深圳子科生物科技有限公司-技術(shù)部，僅供參考！）