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深圳子科生物科技有限公司
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常用抗原修復方法(子科生物)

時間:2016/6/27閱讀:309
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用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片:
1)抗原熱修復 可根據實驗室的具體條件,選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復。抗原熱修復可選用各種緩沖液,如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等,但實驗證明,以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)效果。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液(粉劑)配制,取該粉劑一包溶于1000ml的蒸餾水中,混勻,其pH值在6.0 ± 0.1,如因蒸餾水本身造成的pH值偏差,請自行調整。
(1)高壓熱修復 切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0,工作液)或0.001M EDTA(pH8.0)注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上,放入鍋內,使切片位于液面以下,蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時(約加熱5~6分鐘后),計時1~2分鐘,然后將壓力鍋端離熱源,冷水沖至室溫后,取下氣閥,打開鍋蓋,取出切片,蒸餾水洗后,PBS洗2分鐘×3,下接免疫組化染色步驟。
(2)煮沸熱修復 切片脫蠟至水后,放入盛有0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0,工作液)的容器中,并將此容器置于盛有一定數量自來水的大器皿中,電爐上加熱煮沸,從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鐘,然后端離電爐,室溫冷卻20~30分鐘,蒸餾水沖洗,PBS洗,
(3)微波熱修復。切片脫蠟至水后,3%H2O2處理10分鐘,蒸餾水洗2分鐘×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)的容器中,置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間并持續10~15分鐘(注意:無論是使用醫用或家用微波爐,請根據具體機型酌情設置條件,務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求)。取出容器,室溫冷卻10~20分鐘(注意:不可將切片從緩沖液中取出冷卻,以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型)。PBS洗,下接免疫組化染色步驟。適用的抗原有:AR,Bax,Bcl-2,C-fos,X-jun,C-kit,C-myc,E-cadherin,Chromogranin A,Cyclin,ER,Heat shock protein,HPV,Ki-67,MDMZ,p53,p34,p16,p15,P-glycoprotein,PKC,PR,PCNA,ras,Rb,TopoismeraseⅡ等。
2)酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃,切片也預熱至37℃,消化時間約為5~30分鐘(胰酶的zui終濃度可以根據使用者的要求進行調整,濃度范圍可以從0.05%至0.25%); 胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘。皂素(Saponin):一般使用濃度為2~10mg/ml的saponin溶液,消化時間為室溫孵育30分鐘。 適用于被固定遮避的抗原,其中有:Collagen,Complement,Cytokeratin,C-erB-2,GFAP,LCA,LN等。

深圳子科生物科技有限公司技術部整理,僅供參考,有疑問可以來電探討。

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