實(shí)驗(yàn)原理受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法如化學(xué)試劑法的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變，成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞。進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制，表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可篩選出轉(zhuǎn)化子(即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞)。
CaCl2法的基本原理：細(xì)菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，細(xì)胞膨脹成球形，外源DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸鹽混合物黏附于細(xì)胞表面，經(jīng)短時(shí)間42℃熱激處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。將細(xì)菌放置在非選擇性培養(yǎng)基中保溫一段時(shí)間，促使在轉(zhuǎn)化過程中獲得的新的表型，如氨芐青霉素耐藥（Ampr）得到表達(dá)，然后將此細(xì)菌培養(yǎng)物涂在含Amp的選擇性培養(yǎng)基上，倒置培養(yǎng)過夜，可獲得細(xì)菌菌落。
轉(zhuǎn)化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細(xì)胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
一、材料
pUC19質(zhì)粒，大腸桿菌感受態(tài)，1.5ml塑料離心管，離心管架，
1000 ul、200ul槍頭，9cm培養(yǎng)皿，一次性濾膜（0.22um），大量碎冰
二、設(shè)備
微量移液器(2μl,200μl,1000μl)，高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)，培養(yǎng)箱，恒溫水浴鍋，恒溫?fù)u床，離心機(jī) 超凈工作臺(tái)，雙蒸水器，冰箱等。
三、試劑準(zhǔn)備
LB固體培養(yǎng)基
LB液體培養(yǎng)基
氨芐青霉素（apm）：無(wú)菌水配置成100mg/ml溶液，用濾膜抽濾，-20℃保存
滅菌雙蒸水ddH2O
四、實(shí)驗(yàn)操作
（1） 平板的制備：LB固體培養(yǎng)基中加入Amp (100μg/ml)，轉(zhuǎn)化反應(yīng)前一天，倒置平板，保存。
（2） 分別用2個(gè)100µl感受態(tài)細(xì)胞懸液(如是冷凍保存液，則需化凍后馬上進(jìn)行下面操作：
*組，質(zhì)粒DNA組：2 µl pUC19質(zhì)粒DNA +100µl感受態(tài)細(xì)胞懸液
第二組，空白對(duì)照組，2ul無(wú)菌水＋100µl感受態(tài)細(xì)胞懸液
（3） 將以上各樣品輕輕搖勻，冰上放置20-30min，于42℃水浴中保溫90s，然后迅速冰上冷卻2min
（4） 立即向上述管中分別加入0.4ml LB液體培養(yǎng)基（在超凈工作臺(tái)操作，不需要在冰上），使總體積到0.5ml，搖勻后于37℃振蕩培養(yǎng)約30-60min，使受體菌恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)，并使轉(zhuǎn)化體表達(dá)抗生素基因產(chǎn)物(Ampr)。
（5） 將培養(yǎng)液以5000rmp離心2min，在超凈工作臺(tái)取各樣品培養(yǎng)液0.1ml在平板上涂布，分別接種于含抗菌素LB平板培養(yǎng)基上（做好標(biāo)記，日期），涂勻。
（6） 在菌液*被培養(yǎng)基吸收后，培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中過夜(12-16小時(shí))，
觀察轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)的情況，待菌落生長(zhǎng)良好而又未互相重疊時(shí)停止培養(yǎng)。（子科生物技術(shù)部編輯）