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上海炎熙生物科技有限公司


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穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 靈敏度高 信號穩(wěn)定

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產(chǎn)品型號Luc-100

品       牌

廠商性質生產(chǎn)商

所  在  地上海市

聯(lián)系方式:華經(jīng)理查看聯(lián)系方式

更新時間:2016-08-15 22:31:46瀏覽次數(shù):576次

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經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:41條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:華經(jīng)理 (經(jīng)理)

產(chǎn)品簡介

穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 靈敏度高 信號穩(wěn)定,是一種以熒光素為底物, 檢測熒光素酶活性的試劑盒。優(yōu)點在于:
1、靈敏度高,檢測范圍廣;
2、發(fā)光檢測,使用方便,哺乳動物無內(nèi)源性表達,不受細胞內(nèi)其他物質影響;
3、試劑盒成分經(jīng)過優(yōu)化處理,信號值可保持長時間穩(wěn)定,半衰期大于5小時,非常適合高通量篩選的要求。

詳細介紹

穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 靈敏度高 信號穩(wěn)定

Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit

 

貨號

規(guī)格

Luc-10

10毫升

Luc-100

100毫升

 

產(chǎn)品原理

螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit),是一種以熒光素(luciferin,也稱螢光素)為底物, 檢測熒光素酶(firefly luciferase, 也稱螢光素酶)活性的試劑盒。螢火蟲熒光素酶是一種分子量約為61 KD的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下, 可以催 化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物發(fā)光(bioluminescence)。生物發(fā)光可以通過化學發(fā)光儀(luminometer)液閃測定儀進行測定。

 

 

 

通過熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系,可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把所研究基因的轉錄調(diào)控元件或 5’啟動子區(qū)克隆在luciferase基因的上游,或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase基因的下游, 構建成報告基因(reporter gene)質粒,然后轉染細胞,用適當方法處理細胞后,測定熒光素酶的活性。通過熒光素酶活性的高低,來判斷處理方法對目的基因的轉錄調(diào)控的影響。

穩(wěn)定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 靈敏度高 信號穩(wěn)定,通過成分優(yōu)化,可以保持信號值長時間穩(wěn)定,非常適合高通量篩選的要求。

 

保存條件:

-20ºC避光保存6個月有效,-80ºC避光保存,一年有效。盡量避免反復凍融。

 

使用方法:

  1. 室溫下融解,同時將培養(yǎng)好的細胞從培養(yǎng)箱中取出,在二者都達到室溫且溫度*時,開始下一步實驗;
  2. 向細胞加入與培養(yǎng)基等體積的穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑,并在室溫下平緩振搖孵育至少5分鐘,以使細胞充分裂解,此過程可以用錫箔紙覆蓋避光。不論細胞培養(yǎng)在何種器皿中,加入與培養(yǎng)基等體積的熒光素酶檢測試劑即可;
  3. 開啟化學發(fā)光儀或具有檢測化學發(fā)光功能的多功能酶標儀,設置適當參數(shù);
  4. 進行讀數(shù),可以直接在96孔板或384孔板中讀數(shù),也可以吸出100-200微升到發(fā)光管中進行讀數(shù)。本產(chǎn)品信號值非常穩(wěn)定,半衰期大于5小時,可達到高通量篩選的要求。

 

螢光素酶報告基因的主要優(yōu)點:

報告基因

優(yōu)點

缺點

螢光素酶

*的靈敏度

需要底物

高信號值

無內(nèi)源活性

  •  

靈敏度好

細菌,血清等內(nèi)源活性高

 

需要底物

  1. (葡糖醛酸糖苷酶)

靈敏度好

90% 的 E.coli, 人/動物細胞中有內(nèi)源活性

植物中內(nèi)源活性低

酶的擴散可引起 “過度報告”

 

需要底物

  1. (分泌性堿性磷酸酶)

分泌性報告基因不需裂解

在癌和其它細胞類型中有高的內(nèi)源活性

 

需要底物

  1. (*轉乙酰基酶)

真核細胞沒有背景表達

放射性的

易于使用

靈敏度底

設備現(xiàn)成液閃儀層析

  1. h半衰期
  1. (綠色熒光蛋白)

顯微鏡亞細胞定位

背景可能高

不需底物

折疊 “情形” 可導致信號差別

 

的優(yōu)點

  1. 靈敏度高,zui低可檢測10‐20摩爾熒光素酶分子,比Western Blot靈敏度高1000倍以上;
  2. 檢測范圍廣,在10-16 M(10 pg/L)至10-8 M(1 mg/L)范圍內(nèi),光強度與熒光素酶濃度成正比;
  3. 發(fā)光檢測,檢測方便,內(nèi)源性低,哺乳動物無內(nèi)源性表達,熒光素酶檢測不受細胞內(nèi)其他物質影響;
  4. 試劑盒成分經(jīng)過優(yōu)化處理,可以使信號值保持長時間穩(wěn)定,半衰期大于5小時,非常適合高通量篩選的要求。

 

主要應用領域

1、啟動子核心區(qū)域檢測,增強子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測;

2、啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用,啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點檢測;

3、細胞信號轉導途徑研究;

4、病毒/細胞相互作用;

5、藥物等化學誘導因素或射線等物理誘導因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)(抑制或增強)。

 

注意事項:

  1. 常見培養(yǎng)基如RPMI1640、DMEM、F-12、MEM等,以及酚紅、血清、PBS和其他緩沖液等,都不影響熒光素酶檢測試劑的使用。穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑經(jīng)過成分優(yōu)化處理,可使信號值保持穩(wěn)定,半衰期大于5小時,非常適合高通量篩選的要求。
  2. 由于溫度對酶反應有影響,所以樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
  3. 為保證熒光素酶檢測試劑的穩(wěn)定,可以采取適當分裝后避光保存的方法,以避免反復凍融和長時間暴露于室溫;經(jīng)測試,反復凍融三次,對測定結果無明顯影響。
  4. 細胞如果在96孔或384孔板中直接讀數(shù),需要使用白色或黑色不透明的培養(yǎng)板,以免發(fā)生孔與孔之間的信號干擾。
  5. 為避免由于質粒轉細胞時效率的差異而帶來的誤差,可以同時轉入海腎熒光素酶(Renilla luciferase)的報告基因質粒或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)的報告基因質粒等作為內(nèi)參。
  6. 本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

常見問題:

  1. Luminometer和熒光分光光度計有何不同? 熒光分光光度計檢測的樣品本身不能發(fā)光,樣品需要由特定波長的激發(fā)光激發(fā),然后才能產(chǎn)生熒光并被熒光分光光度計檢 測。Luminometer檢測的樣品本身可以發(fā)光,不需要激發(fā)光進行激發(fā)。也就是說luminometer是檢測化學發(fā)光(螢光)的儀器。有些型號的熒光分光光度計也具有l(wèi)uminometer的功能,即也可以檢測化學發(fā)光。您所使用的熒光分光光度計能否用于化學發(fā)光的測定請仔細閱讀該儀器的說明書,或咨詢儀器供應商。
  2. 可以進行ATP化學發(fā)光檢測的儀器是否就可以用于本試劑盒的檢測? 是。ATP化學發(fā)光的檢測原理和本試劑盒的原理相同,可以用相同的儀器測定。

 

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