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上海炎熙生物科技有限公司
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CCK-8試劑盒 WST-8 細胞增殖 細胞毒性，
是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8屬于MTT的升級產品，能在電子載體1-甲氧基PMS的作用下被還原成水溶性甲臜產物，生成的甲臜量與活細胞數量成正比，因此顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，可以反映活細胞數量。
CCK-8試劑盒 WST-8 細胞增殖 細胞毒性
Cell Counting Kit -8
| 貨號 | 規格 |
| CT-K-1 | 1毫升,100次反應 |
| CT-K-5 | 5毫升,500次反應 |
| CT-K-10 | 10毫升,1000次反應 |
| CT-K-30 | 30毫升,3000次反應 |
| CT-K-50 | 50毫升,5000次反應 |
檢測原理
Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒 WST-8 細胞增殖 細胞毒性），是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8屬于MTT的升級產品，能在電子載體1-甲氧基PMS的作用下被還原成水溶性甲臜產物，生成的甲臜量與活細胞數量成正比，因此顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，可以反映活細胞數量。
CCK-8法與普通的MTT法相比，具有顯著特點：
★靈敏度高，數據可靠，重現性好
★操作簡便，省時省力
★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞
★無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低
★為1瓶溶液，毋需預制，即開即用
★適合于高通量藥物篩選
CCK-8用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗
CCK-8方法的優勢
CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優勢比較
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
甲臜產物的水溶性 | 差（需加有機溶劑溶解后再檢測） | 好 | 好 | 好 |
產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現配現用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | zui短 |
檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細胞毒性 | 高，細胞形態*消失 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 |
試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
保存條件：
4ºC避光保存一年有效， -20ºC避光保存兩年有效。 避免反復凍融。
CCK-8試劑盒操作說明
CCK-8溶液可直接加入到細胞中，不需要與其它組分預混。由于CCK-8溶液非常穩定并且細胞毒性很小，所以可以進行長時間孵育，例如孵育24-48小時。
在進行以下實驗之前，可先設置空白對照孔，僅加入相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液，不加入細胞。
方法一. 制作標準曲線（測定細胞具體數量）
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞到培養板內。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復孔。
3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后按培養基體積的10%加入CCK-8試劑，培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（使用此標準曲線的前提是實驗的條件要*，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間。）
方法二. 細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養一段時間（37℃,5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
方法三. 細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中加入90μL的細胞懸液。將培養板放在培養箱預培養24小時（37℃，5% CO2）。
2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。
3、將培養板在培養箱中孵育適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。
4、向每孔加入10μL CCK-8溶液。
5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
活力計算：
細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(不加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥)：具有細胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培養基和CCK 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0 加藥)：具有細胞、CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項:
1，由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發問題。一方面，由于96孔板周圍一圈zui容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、 水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。
2，本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應， 所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測。如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。培養基中酚紅和血清的吸光度，在計算時通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
3，有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。加完之后能夠離心，以免CCK-8液滴懸掛在壁上。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
4，若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。
5，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。白細胞可能需要培養較長時間。若使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。
6，若沒有450nm的濾光片，可使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度zui高。
7，金屬對CCK-8顯色有影響。當終濃度為1 Mm的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話，將會*抑制。
8，本產品*于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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