細菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測試劑盒

產品說明書

主要用途

細菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測試劑是一種旨在通過底物亞硝酸鹽，在亞硝酸鹽還原酶的催化作用下，產生氨或一氧化氮，進而使用使用磺胺酸和N,N-二甲基-1-萘胺，呈現無色反應，來定性分析細菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的定性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，重復性好。

技術背景

亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）是一類催化亞硝酸鹽還原為氨或一氧化氮的還原反應的酶，其分成同化型（assimilatory）和異化型（dissimilatory）亞硝酸還原酶，在生物氮循環進行厭氧能量代謝中起著重要作用。同化型酶以鐵氧還原蛋白、FAD、非血紅素鐵、西羅血紅素（siroheme）、NAD（P）H等為電子供體，進行6個電子的還原產生氨（ammonification），包括高等植物、綠藻及藍藻、粗糙脈孢菌（Neur-ospora crassa）、和大腸埃希氏菌（Escherichia coli）等。異化型酶參與使用亞硝酸氧化有機物質的過程，包括單電子反應生成NO和6個電子的還原產生氨。其脫氮作用是細菌或真菌等獲得能量、適應環境生存的生理過程。脫氮細菌、真菌或植物的亞硝酸還原酶有二種：銅型和鐵型。銅型（CuNiR）含有類似于銅藍蛋白（azurin）的銅中心部位，銅藍蛋白為電子供體；鐵型（ccNiR）含有同源雙體，包括c型和d1型細胞色素結構域，細胞色素C為電子供體。亞硝酸鹽在食品工業中用于色素、調味和防止氧化，還用于蔬菜發酵，但是它具有致畸（tetragenic）和致癌作用（carcinogenic），會引起高鐵血紅蛋白血癥（methemoglobinemia）。基于底物亞硝酸鹽（nitrite），通過亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）的催化作用，而還原為氨或一氧化氮，進而使用磺胺酸（sulfanilic acid）和N,N-二甲基-1-萘胺（N, N dimethyl-1-naphthylamine），呈現無色反應，而對照顯示紅色，來定性分析亞硝酸鹽還原酶的活性。

產品內容

培養液（Reagent A） 毫升

反應液（Reagent B） 毫升

顯色液（Reagent C） 毫升

產品說明書 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent C）避免光照；反應液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

恒溫培養箱：用于細菌培養

實驗步驟

• 準備好2個15毫升錐形離心管，標記為：背景對照和待測樣品
• 分別移取xx毫升培養液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 接種用戶自備的待測細菌樣品到待測樣品管
• 放進35℃培養箱孵育48小時（注意：少量菌種可以延長孵育至5天）
• 加入xx微升反應液（Reagent B），混勻
• 加入xx微升顯色液（Reagent C），混勻
• 觀察2分鐘
• 結果：

注意事項

• 本產品為20次操作
• Veillonellae、Haemophili、Staphylococci、Corynebacteria、Lactobacilli、Flavobacteria、Fusobacteria、Enterobacteriaceae、Neisseria spp、Leuconostoc等亞硝酸還原酶陽性
• 操作時，須戴手套
• 操作時，嚴格無菌，避免污染母液
• 反應液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全
• 樣品中避免含有各種還原性化學物質，包括巰基乙醇（2-mercaptoethanol）、二硫蘇糖醇（dithiothreitol；DTT）、維生素C（ascorbic acid）和*（azide）等
• 與背景對照測定顯示紅色相比，待測樣品呈現無色，表明具有酶活性
• 本公司提供系列亞硝酸鹽還原酶分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感