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南京海克爾生物科技有限公司
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閱讀:186發布時間:2018-2-26
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PolyAcrylamide Gel Electrophoresis,簡稱PAGE),用于分離蛋白質和寡核苷酸。
聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。SDS-PAGE根據蛋白質亞基分子量的不同,可以分開蛋白質。該技術zui初由shapiro于1967年建立,在樣品介質和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑(SDS即十二烷基硫酸鈉)后,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。
SDS-PAGE是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(APS)為催化劑,以四甲基乙二胺(TEMED)為加速劑。在聚合過程中,TEMED催化過硫酸銨產生自由基,后者引發丙烯酰胺單體聚合,同時甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產生甲叉鍵交聯,從而形成三維網狀結構。
PAGE根據其有無濃縮效應,分為連續系統和不連續系統兩大類,連續系統電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同,帶電顆粒在電場作用下,主要靠電荷和分子篩效應。不連續系統中由于緩沖液離子成分,pH,凝膠濃度及電位梯度的不連續性,帶電顆粒在電場中泳動不僅有電荷效應,分子篩效應,還具有濃縮效應,因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。不連續體系由電極緩沖液、濃縮膠及分離膠所組成。濃縮膠是由AP催化聚合而成的大孔膠,凝膠緩沖液為pH6.7的Tris-HCl。分離膠是由AP催化聚合而成的小孔膠,凝膠緩沖液為pH8.9 Tris-HCl。電極緩沖液是pH8.3 Tris-*緩沖液。2種孔徑的凝膠、2種緩沖體系、3種pH值使不連續體系形成了凝膠孔徑、pH值、緩沖液離子成分的不連續性,這是樣品濃縮的主要因素。
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