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南京海克爾生物科技有限公司
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閱讀:1241發布時間:2017-12-25
1.細胞爬片;
2.PBS清洗標本 3次,各1 min。
3.冷丙酮4℃固定15min(或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min);
4.空氣干燥5min,PBS漂洗3min,3次;
5.細胞通透:0.5% Triton X-100(溶于PBS)通透細胞,室溫15~30min(丙酮固定法不用此步驟);
6.PBS漂洗2次,每次5min;
7. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min,PBS洗;
8.正常山羊血清封閉,37℃孵育10~20min,甩掉封閉液,勿洗;
9.加適當比例的一抗工作液孵育,4℃過夜或37℃ 1~2h;
10.PBS漂洗2次,每次5min;
11.加入酶標二抗工作液,37℃,30-60min;
12.PBS漂洗2次,每次5min;
13.加DAB顯色劑顯色(或AEC顯色),鏡下觀察結果,適時終止;
14.蘇木素輕度復染;
15.脫水透明。
16. 封片,中性樹膠封片。 光學顯微鏡觀察,拍片。圖象評分。
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