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細胞免疫組化參考實驗步驟

閱讀:1241發布時間:2017-12-25

1.細胞爬片;  

2.PBS清洗標本 3次,各1 min。  

3.冷丙酮4℃固定15min(或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min);  

4.空氣干燥5min,PBS漂洗3min,3次;  

5.細胞通透:0.5% Triton X-100(溶于PBS)通透細胞,室溫15~30min(丙酮固定法不用此步驟);  

6.PBS漂洗2次,每次5min;  

7. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min,PBS洗;  

8.正常山羊血清封閉,37℃孵育10~20min,甩掉封閉液,勿洗;  

9.加適當比例的一抗工作液孵育,4℃過夜或37℃ 1~2h;  

10.PBS漂洗2次,每次5min;  

11.加入酶標二抗工作液,37℃,30-60min;  

12.PBS漂洗2次,每次5min;  

13.加DAB顯色劑顯色(或AEC顯色),鏡下觀察結果,適時終止;  

14.蘇木素輕度復染;  

15.脫水透明。

16. 封片,中性樹膠封片。  光學顯微鏡觀察,拍片。圖象評分。


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