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抓出污染細胞的真兇

閱讀:359發布時間:2017-8-14

 細胞培養中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染,那么他們污染細胞的特點分別是什么呢?怎樣能夠減少污染現象的發生?

1-細菌

    細菌污染常見的有大腸桿菌,葡萄球菌等。細菌污染較易發現,在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,培養液一般會在短時間內變黃,有時靜置的培養液不混,稍加震蕩會有很多混濁物漂起。顯微鏡下可見培養液中有大量圓球狀顆粒物漂浮,有時在細胞表面及周圍有大量細菌存在,細胞停止生長并有中毒表現。

處理:①在培養液中加入相應的抗生素,能夠預防絕大多數的細菌污染。

2-真菌

   真菌污染是細胞培養過程中zui常見的一種,尤其梅雨季節快要到了,進行細胞培養時更易污染。污染細胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見,較易被發現,短期內培養液多不混濁,倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲,并懸浮飄蕩在培養液中。

很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形態呈卵形,散在細胞周邊和細胞之間生長。鏡下看時,要將培養瓶用酒精棉球擦干凈,以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。

真菌污染后,細胞生長變慢,但zui后由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。

3-支原體

    支原體的大小介于細菌和病毒之間,是一種獨立生活的微生物。對熱敏感,對一般抗生素不敏感。支原體的形態多變,多吸附在細胞表面和細胞之間。電鏡下觀察,中心有高密度的密集顆粒,橫斷面與細胞微絨毛相似。

因國內的血清大多數都沒有做支原體陰性檢測,而支原體又是牛血清中zui常見的微生物之一。支原體污染細胞后,培養液輕微發生混濁.但細胞變化不顯著,隨著細胞的培養會慢慢死亡。

支原體污染檢測(熒光染色法):DNA和與DNA特異性結合的熒光染料結合,使得支原體的DNA著色,然后用熒光顯微鏡觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。

解決:

1)抗生素排除法:支原體污染預防比解決好。如果不小心污染后,可加入高濃度抗生素(常規使用的5倍濃度)作用24-48小時,再換入常規培養液,但該法不保證有效。*用量:* 200μg/ml ,四環素10μg/ml ,*50μg/ml 。

2)加溫除菌:支原體不耐熱,可以對支原體污染的細胞熱處理除菌。因高溫對細胞本身也會產生一定影響,故熱處理前需*行預實驗,確定對細胞影響zui小而能zui大程度的殺死支原體的時間。

4-黑膠蟲

    黑膠蟲的存在目前尚有爭議,其在低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。

5-原蟲

    培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環。

6-病毒

    組織細胞培養過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產生病毒污染。目前,從原代猴腎細胞的培養中已發現不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

7-非同種細胞污染

    即細胞交叉污染,由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。非細胞培養物所造成的化學成分的污染也偶有發生,大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學物質所致。

污染是細胞培養的大敵,預防和避免污染是成功培養細胞的關鍵之一。危機意識要貫徹實驗的始終,否則不僅浪費時間,而且浪費人力、物力,甚至造成無法彌補


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