問題1：培養液pH 值變化太快
可能原因
（1）CO 2 張力不對
（2）培養瓶蓋擰得太緊
（3）NaHCO 3 緩沖系統緩沖力不足
（4）培養液中鹽濃度不正確
（5）細菌、酵母或真菌污染
建議解決方法
（1）按培養液中NaHCO 3 濃度增加或減少培養箱內CO 2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO 3 對應CO 2 濃度為5％ 到10％。
（2）松開瓶蓋1/4 圈。
（3）改用不依賴CO 2 培養液。加HEPES 緩沖液至10 到25mM 終濃度。
（4）在CO 2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
（5）丟棄培養物，或用抗生素除菌。
問題2：培養液出現沉淀，但pH值不變
可能原因
（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養基成分沉淀下來
（2）冰凍保存培養液
建議解決方法
（1）用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后滅菌。
（2）將培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。
問題3：培養液出現沉淀， 同時pH 發生變化
可能原因
細菌或真菌污染
建議解決方法
丟棄培養物，或用抗生素除菌。
問題4：培養細胞不貼壁
可能原因
（1）*消化過度
（2）支原體污染
（3）培養瓶瓶底不干凈
（4）培養液pH值過堿（NaHCO 3 分解）
（5）消化液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當
（6）細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）
（7）接種細胞起始濃度太低或太高
建議解決方法
（1）縮短*消化時間或降低*濃度。
（2）分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。
（3）注意刷洗，或換用一次性塑料培養瓶
（4）使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO 2 （將培養液敞口放入培養箱也可）
（5）重新配置消化液或培養液
（6）啟用新的保種細胞
（7）調節zui接種細胞濃度
問題5：懸浮細胞成簇
可能原因
（1）培養液中含鈣、鎂離子
（2）支原體污染
（3）蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋
（4）DNA污染
建議解決方法
（1）用無鈣鎂*洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。
（2）分離培養物，檢測支原體。如發現支原體污染，丟棄培養物。
（3）用DNase I 處理細胞。
問題6：原代細胞培養物污染
可能原因
原代培養組織在進入培養前已污染
建議解決方法
培養前用含高濃度抗生素的*反復沖洗組織。
問題7：培養細胞生長減慢
可能原因
（1）由于更換不同培養液或血清
（2）培養液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。
（3）培養物中有少量細菌或真菌污染
（4）試劑保存不當
（5）接種細胞起始濃度太低
（6）細胞已老化
（7）支原體污染
建議解決方法
（1）比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應新培養液。
（2）換入新鮮配制培養液，或補加*及生長因子。
（3）用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物。或用抗生素除菌。
（4）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養液需在2－8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存，并在2 周內用完。
（5）增加接種細胞起始濃度。
（6）換用新的保種細胞。
（7）分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。
問題8：培養細胞死亡
可能原因
（1）培養箱內無CO 2
（2）培養箱內溫度波動太大
（3）細胞凍存或復蘇過程中損傷
（4）培養液滲透壓不正確
（5）培養液種有毒代謝產物堆積
（6）更多原因參考問題4和問題7
建議解決方法
（1）檢測培養箱內CO 2
（2）檢查培養箱內溫度
（3）取新的保存細胞種
（4）檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260 – 350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。
（5）換入新鮮培養液
