219.蘇州華宇凈化工作臺在一種簡單、經濟、的大量肝細胞培養方法中１材料與方法
１．１ 實驗材料 昆明種封閉群乳小鼠由瀘州醫學院 動物科提供。ＤＭＥＭ培養基、新生小牛血清均購于 Ｈｖｃｌｏｎｅ公司。堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、過碘酸（ＡＲ）均為上海試劑廠生產。二氧化碳培養箱（９８００８４４４，Ｕ． Ｓ．Ａ），超凈工作臺（SW-CJ-1F．蘇州市華宇凈化設備有限公司），倒置顯微鏡（ＸＳＴ—Ｄ，重慶光學儀器廠），超純水儀（Ｍａｘｉｍａ型，英國）。
１．２ 方法
１．２．１ 肝組織塊的獲得與培養取１～３ ｄ的乳小鼠 ５只，于超凈工作臺內消毒，剖腹，取出肝組織，切割 為約ｌ ｍｍ３的碎塊、ＰＢＳ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４）清洗，然后移入玻璃離心管內。用眼科剪剪碎至糊狀，加入５ 倍體積的０．１％胰蛋白酶，置３７℃下消化１０ ｍｉｎ，其間 不時振搖。然后靜置待組織塊沉淀，棄上清液，Ｈａｎｋｓ液洗組織塊２次，以除去血細胞及其他細胞；zui后再 用少許１０％小牛血清ＤＭＥＭ培養液洗１次，以充分終 止酶的活性。在消化好的肝組織塊內加少許培養液， 混勻后平均轉移于５個培養瓶（５０ｍＬ）內，使組織塊 均勻分布，置３７℃、５％ＣＯ：孵箱內孵育３ ｈ，組織塊貼 壁后再補加１０％小牛血清培養液４ｍＬ／瓶，繼續培養， 每兩天換培養液１次，并觀察細胞生長情況。
１．２．２肝細胞的傳代培養 大約６～７ ｄ肝細胞長滿 瓶底，即可傳代。倒去原培養液，加消化液（０．２５％的胰 蛋白酶，Ｏ．０２％的ＥＤＴＡ）覆蓋瓶底，倒置顯微鏡下見細胞變圓（約３。５ ｍｉｎ），立即倒掉消化液，加１０％小牛 血清培養液洗１次．再加１０％小牛血清培養液４ ｍＬ 輕輕吹打約３ ｍｉｎ后。靜置使組織塊沉淀，轉移上層細胞懸液于另一干凈培養瓶繼續培養。每兩天換培養 液１次。并繼續觀察細胞生長情況。 原培養瓶去除組織塊后，于倒置顯微鏡下見有散 在細胞貼附于瓶底．多為梭形、三角形、星形等變形細胞．采用ＰＡＳ染色法【ｚ】對原培養瓶內殘留細胞進行染 色．大多細胞胞質中未見粉紅色糖原顆粒，核呈空泡 狀。繼續采用Ｈ．Ｅ復染胞核，可見空泡狀的核染成紫 藍色，未見有雙核細胞（圖ｌａ，本文照片見封三）。
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