實驗的過程需要注意，但是前期的準(zhǔn)備更是馬虎不得。有位客戶因為準(zhǔn)備問題的不*了解而來電給了我公司王，我們很快解決了問題，考慮到一定還有其他朋友想要了解，王要將此發(fā)布出來分享給熱愛elisa實驗的朋友們。
    1、不管是試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在使用之前我們都要仔細(xì)閱讀說明書。
    2、同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
    3、按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。
    4、標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。
5、準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。
    6、根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
    7、按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。
    8、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
    9、ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
    10、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
    11、一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
    12、為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
    13、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
    14、當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
上海滬宇公司每周都會有實驗知識以及動態(tài)等等，本周主題討論在elisa實驗之前需要做好哪些準(zhǔn)備工作，如果您還有什么不懂的或者需要了解其它技術(shù)、產(chǎn)品信息都可以我公司王。