免疫血清的制備及效價測定
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制備免疫血清的傳統方法是將抗原注入動物體內，由動物體內 B 細胞增殖分化成漿細胞產生抗體。由于抗原分子(*抗原)具有多種抗原決定簇，每一種抗原決定簇可以激活具有相應抗原受體的 B 細胞系產生該決定簇的抗體，因此用抗原免疫機體獲得的免疫血清一般均為多克隆抗體。
制備的免疫血清的質量(特異性、親和力及效價高低)受多種因素的影響，只要包括抗原的性質、免疫動物的種類及狀態、免疫劑量、免疫途徑及免疫方案(加強免疫次數，間隔時間，佐劑的使用等)等。因此要獲得高質量的免疫血清需先通過預實驗摸索確定*免疫方法。
測定免疫血清中抗體效價的方法很多，如凝集實驗，沉淀實驗、溶血實驗， ELISA 等均可用于對抗體效價的測定，本次實驗將采用溶血實驗測定所獲得的免疫血清的效價。
一、免疫血清(漿)的制備
我們要制備的是抗綿羊紅細胞 (SRBC) 的免疫血清，即溶血素。
實驗材料
1. 20% SRBC
2. 小白鼠
3. 無菌 1ml 注射器
4. 抗凝劑 (或肝素)
5. 小試管
實驗步驟
1. 免疫動物：初次免疫小鼠為腹腔注射20%SRBC0.2ml,4天后以相同劑量、相同途徑加強免疫一次。
2. 獲得免疫血清(漿)：小鼠初次免疫7天后,摘眼球取血,收入加有抗凝劑的小試管中,2000轉/分離心1分鐘,上清即為免疫血漿。
二、免疫血清(漿)的效價測定—溶血法
實驗原理
該方法的基本原理是根據補體的經典激活途徑，即當抗原抗體復合物存在時，補體系統被激活，zui后形成的攻復合體可使細胞性抗原溶解。當實驗中抗原和補體的量固定不變，且對于抗體相對過量時，則隨著抗體量的不同，被溶解的細胞性抗原的量也不同，兩者成正比關系，因此根據溶解的抗原的多少就可以判斷出抗體的量。
實驗材料
1. 待測免疫血清(漿)
2. 20%SRBC
3. 補體
4. 生理鹽水
5. 試管
實驗方法
1. 將前面獲得的小鼠抗 SRBC 免疫血漿首先稀釋 10 倍，成為 1:10 免疫血漿。
2. 取3個試管,分別編號為A、B、C,用于對1:10免疫血漿的3倍、4倍和5倍稀釋，即A號管內為1:30的免疫血漿;B號管為1:40 的免疫血漿；C號管為1:50的免疫血漿。
3. 取 15 支試管，分為A、B、C三列，每列5只，先給每管中加入生理鹽水0.5ml,再從A、B、C號管中分別吸取0.5ml血漿加入相應各列的*個管中,然后各列再進行倍比稀釋,血清稀釋度如下表：
管號
1
2
3
4
5
A 列
1:60
1:120
1:240
1:480
1:960
B 列
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280
C 列
1:100
1:200
1:400
1:800
1:1600
注意每列的zui后一管應該棄去0.5ml液體。
4. 向每個試管中分別加入SRBC0.25ml和補體0.25ml 。
5. 混均各管中的液體,置37°C水浴30~40分鐘。
結果判定
以發生*溶血的zui高血清稀釋度管為效價判定管，其血清稀釋度即為免疫血清的效價。
注意事項
1. 動物免疫時注意確保SRBC被注射到了腹腔中,要避免注入其他臟器(如腸、膀胱)內。
2. 稀釋血清時盡量做到，注意用于不同列的吸管不要混用。
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