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更新時(shí)間:2024-07-26 14:14:38瀏覽次數(shù):595次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 環(huán)保在線貨號 | CS-X3293 | 規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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生長特性 | 貼壁 | 組織來源 | 胃癌組織 |
人胃癌組織成纖維細(xì)胞
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 培養(yǎng)基 | 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
組織來源 | 胃癌組織 | 貨號 | CS-X3293 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
傳代特性 | 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài) | 推薦換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
2.組織來源:胃癌組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介:
人胃癌組織源成纖維細(xì)胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織;胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤,在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居首,胃癌可發(fā)生于胃的任何部位,其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部,胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累,絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中,涉及諸多復(fù)雜的過程,如細(xì)胞外基質(zhì)的硬化和降解、新生血管的形成等,而這些過程會(huì)直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境(Tumor mircoenvironment)的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境,由不同種類的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)構(gòu)成,包括纖維細(xì)胞,免疫細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞等,腫瘤細(xì)胞通過調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞,創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件,從而使得腫瘤得到進(jìn)展。越來越多的證據(jù)表明,腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中,研究多也是主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來。胃癌組織源成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。剛分離的胃癌組織源成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
5.方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織成纖維細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌組織成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
操作步驟:
步驟1:從冰箱拿出無血清非程序凍存液,待用
步驟2:離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞(貼壁細(xì)胞消化下來離心,懸浮細(xì)胞直接離心,轉(zhuǎn)速1200rpm或250g,時(shí)間3min)
步驟3:棄上清,加入適量無血清非程序凍存液,重懸細(xì)胞
步驟4:按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標(biāo)記
步驟5:將凍存管直接移入-80℃冰箱中,24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
在沒有凍存盒或者非程序凍存液時(shí),可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞,且效果不穩(wěn)定,同樣需要先做凍存測試。
注意事項(xiàng):
1、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2、收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
1、收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2、加入0.25%(w / v)0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人子宮內(nèi)膜干細(xì)胞
大鼠卵巢成纖維細(xì)胞
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞
人卵巢成纖維細(xì)胞
小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞
大鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞
兔尿道平滑肌細(xì)胞
小鼠腎小球系膜細(xì)胞
大鼠腎小球系膜細(xì)胞
人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞
小鼠膀胱移行上皮細(xì)胞
大鼠膀胱移行上皮細(xì)胞
人子宮頸上皮細(xì)胞
小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞
大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞
人端粒mei逆轉(zhuǎn)錄mei(TERT)檢測試劑盒
人脂氧suA4(LXA4)ELISA檢測試劑盒
人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)檢測試劑盒
人α-黑色su細(xì)胞刺激su(α-MSH)檢測試劑盒
禽白血病病毒J亞群RT-PCR試劑盒
擬桿菌屬通用PCR檢測試劑盒
豬流感(SIV)核suan檢測試劑盒
花生PCR檢測試劑盒
馬輪狀病毒RT-PCR試劑盒
禽白血病病毒E亞群RT-PCR試劑盒
侵肺巴斯德菌PCR檢測試劑盒
人胃癌組織成纖維細(xì)胞馬生殖泰勒氏菌PCR試劑盒
馬流產(chǎn)沙門氏菌PCR試劑盒
腔闊盤吸蟲PCR試劑盒
壞死性肝胰腺炎(NHPB)核suan檢測試劑盒
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