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| 規格 | 5×105Cells/T25培養瓶 | 組織來源 | 牙周膜組織 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CS-X3264 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
產品信息：
貨號 | CS-X3264 | 組織來源 | 牙周膜組織 |
傳代特性 | 可傳5代左右；3代以內狀態 | 培養基 | 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
細胞形態 | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
培養條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% | 換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
商品介紹：
產品名稱：大鼠牙周膜成纖維細胞 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠牙周膜成纖維細胞分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結締組織所構成。多數纖維排列成束，纖維的一端埋于牙骨質內，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內；牙周膜內有神經、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞，是牙周膜主要的間質細胞，它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖維和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程。現在，利用牙周膜細胞建立體外模型，已經成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。 5.方法簡介： 公司實驗室分離的大鼠牙周膜成纖維細胞采用膠原酶-yi蛋白酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 公司實驗室分離的大鼠牙周膜成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態 成纖維細胞樣 傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳 消化液 0.25%yi蛋白酶 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞保存方法：
（一）細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
注意事項：
1）、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質，應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。
2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。
3）、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。
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操作步驟：
1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養基，使細胞處于指數生長期。
2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
3）、離心收集培養之細胞，用加血清的培養基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數細胞濃度及凍前存活率。
4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。
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