小鼠胰島β細胞

2.組織來源：胰腺組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠胰島β細胞分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳suan氫鈉、yi蛋白酶原、脂肪酶、淀粉mei等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質、脂肪和糖的作用。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細胞組成：α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細胞分泌胰島素，降低血糖；γ細胞分泌生長抑su，以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌；PP細胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細胞，即胰島B細胞，是胰島細胞的一種，屬內分泌細胞的一種，能分泌胰島素，與胰島α細胞分泌的胰高血糖素一起起到調節血糖的作用。胰島B細胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足（胰島素抵抗），會使血糖升高，從而引發糖尿病。而胰島B細胞癌變會生成胰島素瘤，引起惡性血糖降低癥狀。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠胰島β細胞采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用yi酶逐級消化胰島制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠胰島β細胞經Insulin含量檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩定，同樣需要先做凍存測試。

注意事項：

1、收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。

3、由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

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