小腸結腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）

【質控標準】

1.   陰性質控品的檢測結果應為陰性，無指數擴增期，Ct=40或無Ct；

2.   陽性質控品的檢測結果應為陽性，有明顯的指數擴增期，Ct值應小于等于35；

3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。

英文名稱：
型號：CP913965

規格：50T

分類：PCR-熒光探針法

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

運輸：低溫、避光。

有效期：一年

本產品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

規格及成分：

PCR檢測試劑盒流程示意圖：

【結果分析條件設定】

u 基線（Baseline）設定：應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應比早出現指數擴增的樣本Ct值減少1~3個循環，建議基線設為6~15。

u 閾值(Threshold)設定：將閾值線設定在剛好超過正常陰性質控品擴增曲線的高點。

實驗操作：

1. 模板制備（樣本制備區）

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產品，具體過程詳見產品說明書。

2．添加模板（模板添加區，放置于冰盒中進行）

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

取出所需測試數的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑解凍，離心 30 秒，在管蓋上標記管名（陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序為待測樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進行擴增反應。

3. 擴增反應（擴增及產物分析區）

①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設置實驗名稱及反應時間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀，點擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環。

其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

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