Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒可應用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。在正常細胞中，磷脂酰絲an酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲an酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲an酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲an酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素（EGFP、FITC）標記，以標記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。與FITC 的綠色熒光信號相比，EGFP 的綠色熒光信號具有信號強，不易淬滅，穩(wěn)定性高等優(yōu)點，故本試劑盒采用EGFP作為熒光標記探針。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉(zhuǎn)染：?

準備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：