Caspase 3活性檢測試劑盒(比色法)細胞凋亡

商品屬性：

商品介紹：

Caspase 3，即Cysteine-requiring Aspartate Protease 3，也稱CPP32、Yama或apopain，屬于Caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily)，系一種在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶，也是哺乳動物細胞中研究最多的一個Caspase。 Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，且可以直接特異性剪切多種Caspase底物，包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)、ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin和fodrin等。這些由Caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外，caspase 3在細胞核凋亡和細胞起泡(Cell blebbing)過程中也起到了關鍵作用，包括染色質固縮(chromatin condensention)，DNA片段化(DNA fragmentation)等。

Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric是一款簡單快速檢測細胞或組織內Casepase 3活性的試劑盒，其檢測原理是基于Casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline)，pNA在405nm附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 3的活性（黃色產物與Caspase 3酶的活性成正比）。 另外，本試劑盒中還提供了Caspase 3催化產生的黃色產物pNA，以此作為定量caspase 3酶活性的標準品。

試劑盒組份：

Lysis Buffer裂解液————8ml

Assay Buffer檢測緩沖液——8ml

Ac-DEVD-pNA(2mM)—————200μl

pNA(10mM)————————200μl

儲存條件：-20℃

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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