Caspase3/7活細(xì)胞熒光實(shí)時(shí)法試劑盒細(xì)胞凋亡

商品介紹：

凋亡早期的重要特征之一是半胱an酸特異性蛋白酶——caspase家族蛋白的活性激活。這一類酶可以參與到一系列的生化反應(yīng)中，響應(yīng)凋亡早期信號并導(dǎo)致相應(yīng)的蛋白底物剪切，繼而引發(fā)細(xì)胞解體。目的底物可識別的序列包含天門冬an酸殘基，剪切發(fā)生在序列的羰基段。

商品屬性：

Caspase3/7活細(xì)胞熒光實(shí)時(shí)法檢測試劑盒采用新型的熒光底物為原料，可以檢測凋亡細(xì)胞中激活的caspase3/7.這種具有膜親和型的檢測試劑盒由一個(gè)4氨基的小肽（DEVD）和一種核酸結(jié)合染料。凋亡發(fā)生時(shí)，caspase3/7蛋白被激活，從而剪切caspase3/7識別序列DEVD肽段。剪切底物后，游離的核酸染料與DNA結(jié)合，從而發(fā)出亮綠色熒光信號。

操作步驟

1.1 以合適的培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞，加入合適的化合物或藥物，刺激細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡。

1.2 去除藥物或化合物，以新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞2-3次，更換新鮮培養(yǎng)基后，以1μL/mL的量加入caspase3/7檢測液，使得caspase3/7檢測試劑工作液濃度為1μM。（注意： Caspase3/7 檢測試劑工作液濃度為0.5μM~2μM，您根據(jù)細(xì)胞量以及培養(yǎng)液的體積進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化。）

1.3 37℃，避光孵育30min，或室溫孵育45-60min。

1.4 熒光顯微鏡觀察拍照或熒光光度計(jì)讀數(shù)。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：