注意事項：

1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。盡管經測試本試劑反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，為取得良好的使用效果，*次解凍后可適當分裝保存。反復凍融過程中，可能會導致檢測試劑中出現少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經測試不會影響后續的檢測效果。

2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產生相互干擾。

3. 支原體檢測試劑盒細胞凋亡與增殖使用說明中提供了檢測ATP標準品的方法，實際檢測細胞活力時通常并不需要檢測ATP標準品。

操作步驟：

貼壁細胞：

1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。

2.5天后，先吸去培養液，再加入1ml的固定液，靜置20min，

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細胞：

1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。

2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。

本試劑盒是利用熒光染料檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區域，因為支原體的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發波長為352nm，大發射波長為461nm。

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細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調控；

⑤細胞分化及其調控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

細胞生物學研究的常用技術有哪些：

1.顯微技術：包括顯微觀察,顯微操作.

2細胞組分分析技術：離心分離技術,生物大分子定位技術,定量細胞化學分析技術.
3.細胞工程：細胞培養。