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英文名稱 | Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent | 物種 | Mus musculus (Mouse,小鼠) |
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型號 | CS-D191 | 性狀 | 凍干粉 |
小鼠鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)重組蛋白
產品名稱:鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)
PLA2G6; CaI-PLA2; GVI; INAD1; PNPLA9; Ca2+ Independent PLA2; 85 kDa Calcium-Independent Phospholipase A2; Phospholipase A2,group VI(Cytosolic,Calcium-Independent)
型號:CS-D191
酶與激酶
代謝通路
物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)
來源:原核表達
宿主E.coli
內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::Membrane; Peripheral membrane protein. Cytopla
預測分子量:28.3kDa
實際分子量:28kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Leu481~Val702 (Accession # P97819) with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點:9.5
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規格:10μg50μg200μg1mg5mg
種屬 | (Mouse,小鼠) | 型號 | CS-D191 |
純度 | > 95% | 性狀 | 凍干粉 |
用途 | 僅供科研實驗 | 規格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
1、組織蛋白提取
1)所需器材:制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管(高溫高壓處理)、一個大冰盒、一個1.5ml EP管盒、手套、眼科剪(高溫高壓處理)、新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織、保存于4℃冰箱的PBS(高溫高壓處理)、移液槍、吸頭(高溫高壓處理)、兩套研磨棒(高溫高壓處理)、掌上離心機、濾紙、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟(PMSF,一種蛋白酶抑制劑,劇毒)、離心機、燒杯、2×SDS凝膠上樣緩沖液、二硫蘇糖醇(DTT)、震蕩器、泡沫板。
a.制冰機制冰;
b.標記筆將兩套EP管做好標記;
c.將大冰盒、EP管盒裝上冰,一套標記筆做好標記的EP管放置于大冰盒中,另一套標記筆做好標記的EP管放置于EP管盒中,戴好手套,帶上EP管盒、眼科剪剪取黃豆大小(約100mg)新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織;
d.取出保存于4℃冰箱的PBS,往EP管中滴加1ml PBS,眼科剪剪碎組織(動作快),掌上離心,棄上清,再往EP管中滴加1ml PBS,研磨棒研磨,3000轉離心10分鐘,棄上清,濾紙盡可能吸干管口殘留液體,估算EP管中沉淀物體積,以上步驟盡可能在冰上操作;
e.從4℃冰箱取出三去污裂解液,-20℃冰箱中取出PMSF置于大冰盒中,往EP管中滴加沉淀物3-5倍體積的三去污裂解液(一般為5倍),再加入PMSF(二者比例為94:6),研磨棒研磨(冰上充分裂解20-30分鐘),以上步驟均需在進行;
f.離心機預冷,將充分裂解后的組織液4 ℃、10000轉離心10分鐘;
g.將燒杯用自來水洗凈,倒入單蒸水,電爐上煮沸;
h.備好2×SDS凝膠加樣緩沖液(存放于常溫),取出保存于-20℃冰箱的DTT,置于大冰盒中,將離心后的上清液用移液槍定量吸至另一套EP管中(勿吸取下層沉淀物),按上清液:2×SDS:DTT =1: 0.8:0.2加入2×SDS 及DTT,掌上離心,然后小心將EP管插入泡沫板,投入已煮沸的燒杯中煮6-8分鐘(電爐功率不要調太大,以免管蓋爆開);
i. 將泡沫板用鑷子取出,置大冰盒中冷卻10分鐘,掌上離心,再放入-20℃冰箱保存備用。
注意:裂解液也可酌情選用單去污裂解液或細胞裂解液等。
2、貼壁細胞蛋白提取(細胞蛋白含量一般約為1x10-9mg/細胞)
1)所需器材:制冰機、細胞刮刀、標記筆、兩套1.5ml EP管(高溫高壓處理)、兩個大冰盒、手套、長滿細胞的培養瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟(PMSF,一種蛋白酶抑制劑,劇毒)、移液槍、吸頭(高溫高壓處理)、濾紙、離心機、燒杯、4×SDS凝膠上樣緩沖液、二硫蘇糖醇(DTT)、泡沫板。
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