人乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來(lái)源：乳腺癌組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自患有乳腺癌的女性乳腺組織；女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持機(jī)體生命活動(dòng)的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前，乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見(jiàn)腫瘤。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存

在沒(méi)有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測(cè)試。

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠外周血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞

RK-13 (兔腎細(xì)胞系)

RT-112(人膀胱癌細(xì)胞)

SCC-25 [SCC 25; SCC25] (人舌磷癌細(xì)胞)

SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)

SK-N-BE (2) (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

SNU-387 (人肝癌細(xì)胞)

SUM159PT (人乳腺癌細(xì)胞系)

SW-13 (人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞)

T24 [T-24] (人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞)

TE-11 (人食管癌細(xì)胞)

TSCCa (人舌鱗癌細(xì)胞)

U-937 (人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)

VERO C1008 [Vero E6] (非洲綠猴腎細(xì)胞)

WRL68 (人肝細(xì)胞)

人高危型乳頭狀瘤病毒衣殼蛋白L1(HR-HPVL1)抗體(IgG)試劑盒ELISA

人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)試劑盒elisa

人丁型肝炎IgM(HDV IgM)檢測(cè)試劑盒

人S100B蛋白(S-100B)ELISA檢測(cè)試劑盒

人乳頭瘤病毒18 PCR試劑盒

白芷染料法PCR鑒定試劑盒

魚(yú)特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌C類磷脂mei基因(283bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒

輪狀病毒D群RT-PCR試劑盒

禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒

禽腺病毒A型PCR試劑盒

人乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞螺源性成分PCR試劑盒

漏斗狀帶絳蟲(chóng)PCR試劑盒

禽腦脊髓炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒

豬肺炎支原體PCR檢測(cè)試劑盒