標(biāo)本采集的基本原則：盡早采集、根據(jù)可疑的病原體，選擇不同采集時機(jī)和標(biāo)本種類、在抗生素應(yīng)用前采集、遵守?zé)o菌操作、正確保存和運(yùn)送。容器應(yīng)密封不易碎，標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。
1.血液標(biāo)本
正常人的血液是無菌的。當(dāng)細(xì)菌侵入時可引起嚴(yán)重的菌血癥或敗血癥。
一般情況下在患者發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集；持續(xù)性菌血癥可隨時采集；間歇性菌血癥，應(yīng)預(yù)測其體溫上升期進(jìn)行采血。一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如兩側(cè)肘靜脈或動、靜脈同時采??；對于已使用抗生素而無法停止的患者，也應(yīng)在下次用藥前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高陽性率。采血量成人一般5~10ml，嬰幼兒1~2ml。
采集的血液標(biāo)本注入培養(yǎng)瓶中*行增菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基和血液標(biāo)本量的比例應(yīng)>10：1，將血液中的各類殺（抑）菌物質(zhì)充分稀釋。需氧菌常用培養(yǎng)基有胰酪蛋白大豆胨肉湯和葡萄糖酚紅肉湯等，常加入對氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺類，*酶2單位/ml破壞*類，*中和*、四環(huán)素、*、*、*及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸鈉（sodium polyanethol sulfonate, SPS）可抑制血清中的抗菌物質(zhì)，并對氨基糖苷類和多肽類抗生素有滅活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生長因子。
培養(yǎng)瓶每天觀察一次。如發(fā)現(xiàn)①培養(yǎng)瓶內(nèi)液體渾濁；②血球?qū)由厦娉霈F(xiàn)顆粒狀的生長物，并且有自下而上的溶血；③有明顯的凝塊；④液體表面有菌膜，培養(yǎng)液清晰或渾濁等，表明有細(xì)菌生長。直接進(jìn)行涂片染色初步報告。同時分別接種血平板、巧克力（色）平板，普通培養(yǎng)和5%CO2 35℃培養(yǎng)。也可直接進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)。無細(xì)菌生長跡象的培養(yǎng)瓶孵育至第7d，接種血平板、巧克力（色）平板，分別進(jìn)行普通培養(yǎng)和5%CO2環(huán)境35℃孵育24h。為了提高檢出的速度，在培養(yǎng)的第2~3d時應(yīng)移種一次。
有厭氧菌感染時，同時注入需氧瓶和厭氧瓶，厭氧培養(yǎng)基通常用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、牛心腦浸液肉湯等；培養(yǎng)液中有刃天青，無氧時無色，有氧時呈紅色。需氧瓶和厭氧瓶同時渾濁，或需氧瓶無生長而厭氧瓶液體渾濁，提示厭氧菌生長。分別接種血平板和厭氧血平板，置需氧和厭氧環(huán)境中，如果都只生長1種細(xì)菌，則為兼性厭氧菌；如果僅在厭氧環(huán)境中生長，可以直接報告“有厭氧菌檢出”。
若長期應(yīng)用抗細(xì)胞壁類抗生素，應(yīng)考慮細(xì)菌L型存在，將血液接種高滲培養(yǎng)基中，分別進(jìn)行需氧、厭氧和5%CO2環(huán)境培養(yǎng)。每周移種2~3次于高滲固體培養(yǎng)基上，觀察有無細(xì)菌L型菌落生長。
2.呼吸道標(biāo)本
正常上呼吸道有正常菌群。下呼吸道正常情況下無細(xì)菌或僅有少量細(xì)菌侵入
*直接涂片檢查 懷疑白喉的標(biāo)本，應(yīng)立即進(jìn)行涂片革蘭染色和異染顆粒染色。如發(fā)現(xiàn)有呈Y、V、T等排列的棒狀桿菌，有異染顆粒時可報告“找到有異染顆粒的革蘭陽性桿菌”。也可用特異性的熒光染色法檢查A群溶血性鏈球菌和百日咳鮑特菌。
培養(yǎng)檢查 接種血平板，觀察細(xì)菌的生長情況。有無特別的菌落生長，如為上呼吸道的正常菌群，比例大致正常，則報告“未檢出致病菌”；如果某一種菌群明顯占多數(shù)或接近純培養(yǎng)，應(yīng)考慮該菌與疾病有關(guān)，鑒定后報告。
呼吸道標(biāo)本特殊菌的培養(yǎng) 百日咳鮑特菌接種在鮑-金（Border-Gengou）平板；白喉棒狀桿菌接種呂氏血清斜面或雞蛋培養(yǎng)基，同時接種亞碲酸鉀血平板；腦膜炎奈瑟菌帶菌者的鼻*35℃保溫運(yùn)送，盡快接種在35℃預(yù)溫的卵黃雙抗平板上，置3~5%CO2環(huán)境中35℃孵育24h。流感嗜血桿菌用巧克力平板或選擇性平板。化膿性A群鏈球菌的接種血平板，在接種原始區(qū)貼一張0.04U的*紙片作為A群鏈球菌存在的指示。
痰液標(biāo)本，采集晨痰為好。觀察標(biāo)本的性狀，選取膿血性的部分，如發(fā)現(xiàn)有顆粒、菌塊及干酪樣物，可能是放線菌或真菌感染。有異常惡臭，與厭氧菌有關(guān)。
直接涂片染色檢查發(fā)現(xiàn)，以柱狀上皮細(xì)胞為主，有中性白細(xì)胞及細(xì)菌，則可根據(jù)形態(tài)和染色性直接報告，并且作為分離細(xì)菌時選擇培養(yǎng)基的依據(jù)。如果以鱗狀上皮細(xì)胞為主，很少發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞，則為不合格標(biāo)本。如有顆粒、菌塊及干酪樣物也應(yīng)進(jìn)行涂片檢查，發(fā)現(xiàn)具有典型的真菌或放線菌樣的菌落特點(diǎn)，可直接報告“找到真菌（放線菌）”。
痰液標(biāo)本在分離接種前一般進(jìn)行前處理，方法有均質(zhì)化和洗凈法。痰液標(biāo)本至少同時接種血平板、巧克力平板和EMB（或Mac Conkey平板）。
3.尿液標(biāo)本
正常人的尿液是無菌的，女性月經(jīng)期間容易污染，不宜采集。
尿液的采集方法有：中段尿采集法、腎盂尿采集法、膀胱穿刺法，膀胱穿刺法一般用于厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本采集或不能正確留取中段尿而需確定診斷的兒童。
尿液標(biāo)本檢驗(yàn) 采用定量培養(yǎng)的方法進(jìn)行尿液菌落計數(shù)區(qū)別污染和病原菌。一般認(rèn)為尿液中的菌落數(shù)>105/ml為病原菌，<104/ml為污染菌，<105/ml >104/ml為可疑需重新復(fù)查，重新復(fù)查后仍為同樣結(jié)果，則應(yīng)視為病原菌。會受到尿量、尿液在膀胱中停留的時間長短及使用利尿劑等影響。計數(shù)的方法有：平板涂布法、傾注培養(yǎng)法和標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)法。
一般接種血平板和EMB（或Mac Conkey平板），或CLED平板。尿液細(xì)菌L型較為常見，可同時接種L型平板。
尿液標(biāo)本的快速檢驗(yàn) 用于尿液快速細(xì)菌檢驗(yàn)的方法有硝酸鹽還原法、氯化三苯四氮唑（TTC）還原法、尿中抗體包被細(xì)菌法和產(chǎn)色培養(yǎng)基法等。
4.腦脊液標(biāo)本
正常人的腦脊液是無菌的。
腦脊液標(biāo)本的采集 以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3~5ml，應(yīng)立即送檢或床邊接種。應(yīng)在35℃保溫運(yùn)送。
直接涂片檢查 由細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎一般呈現(xiàn)混濁，在抗生素治療后亦可不混濁。此外結(jié)核性腦膜炎、無菌性腦膜炎等也不混濁。
可直接涂片革蘭染色檢查，不混濁的可3000r/min離心10~15min后取沉淀涂片染色檢查。如發(fā)現(xiàn)革蘭陰性、凹面相對的雙球菌，位于中性白細(xì)胞內(nèi)外，則可報告“找到革蘭陰性雙球菌，位于細(xì)胞內(nèi)（外），疑似腦膜炎奈瑟菌”；有革蘭陽性矛頭狀的雙球菌，菌體周圍有明顯的莢膜，可報告“找到革蘭陽性雙球菌，疑似肺炎鏈球菌”。用肺炎鏈球菌全價抗血清進(jìn)行莢膜腫脹試驗(yàn)，陽性者可報告“莢膜腫脹試驗(yàn)檢出肺炎鏈球菌”；發(fā)現(xiàn)其他形態(tài)的細(xì)菌，可根據(jù)形態(tài)和染色性進(jìn)行報告。涂片陽性的標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)。
應(yīng)立即接種在35℃預(yù)保溫的血平板和巧克力平板上,置5~10%CO2環(huán)境35℃培養(yǎng)18~24h。腦脊液標(biāo)本一般經(jīng)3d培養(yǎng)仍未見細(xì)菌生長，可報告“經(jīng)3天培養(yǎng)無細(xì)菌生長”。
腦脊液標(biāo)本特殊病原菌的檢驗(yàn)
結(jié)核分枝桿菌 將腦脊液4000r/min離心30min，取沉淀抗酸染色；或?qū)⒛X脊液在室溫下靜置18~24h，待形成纖維網(wǎng)后，傾倒在潔凈玻片上抗酸染色?；蛴媒鸢?ldquo;O”進(jìn)行熒光染色觀察。取沉淀接種羅-瓊培養(yǎng)基進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)。
新型隱球菌 將腦脊液離心沉淀后，進(jìn)行墨汁負(fù)染，可在黑色背景中觀察到折光性很強(qiáng)的菌體和周圍似暈輪樣的透明莢膜，有時可見到生芽的新型隱球菌。
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