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組織切片的霉菌染色方法比較

閱讀:571發布時間:2011-3-31

因病理組織切片常規蘇木紫伊紅染色(下簡稱常規染色)尚能辨認霉菌,所以組織切片的霉菌染色體未得到應有的重視。現將筆者過去霉菌感染的組織切片,進行了6種霉菌染色比較,結果如下。
 
 
  1 材料與方法
    
  從過去霉菌感染或可疑霉菌感染的19例尸檢和5例活檢標本中(主要是念珠菌\曲霉菌及毛霉菌感染,也有個別的放線菌及隱球菌感染),選出有關的組織蠟塊,重作厚4μm切片,脫蠟后分別進行革蘭染色,PAS染色,Grialey氏醛品紅-PAS法染色(1.2.3),Grocott-Gomori二氏**法染色(4.5),Mallory氏纖維蛋白改良法(2)及常規染色。
   
  PAS染色胳改用0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。Grialey氏醛品紅-PAS染色法,用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化。
 
     Grocott-Gomori二氏烏托品*染色法,亦用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化,并以0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。
    
  2 結果
    
  革蘭染色切片內,念珠菌為藍色(革蘭陽性),曲霉菌和毛霉菌則為紅色(革蘭陰性),但毛霉菌著色較淺,結構不清。因系中性紅對比染色,細胞核亦染為紅色,與霉菌孢子鑒別有困難.放線菌及隱球菌均未著色。
   
  PAS法染色,以淡綠作對比染色較蘇木紫為佳,霉菌均顯紅-紫色菌叢中隔及孢子均明顯可見。
     
  Grialey氏醛品紅-PAS法染色,霉菌絲及孢子均染成程度不同的紅-紫紅色。但背景亦為淺紫色,對比不鮮明,但霉菌著色深,鏡下觀察仍較常規紫色者為優。
     Grocott-Gomori二氏**染色法,霉菌均染成黑色,當染色深淺適當時,切片中菌絲的壁,孢子的包膜及菌絲中隔均呈深黑色,菌絲內部顯暗褐色,結構清楚,改用淡綠對比染色,較蘇木紫伊紅染色為鮮明,適合觀察和攝影。
     Mallory氏纖維蛋白改良法,霉菌染為藍-深紫色,背景是蘇木紫及伊紅染色,因此近似常規染色,只是霉菌較深。
     在常規染色中,霉菌的孢子及菌絲一般均染成淺藍色,較細胞核為淺,因為是藍色,有時孢子難以與細胞核或已破碎的細胞核鑒別,而菌絲也長不能和已擠壓成絲狀的細胞核鑒別。所以,常規染色和其他霉菌染色比較,發現常規染色存在以下問題:(1)每張切片中所見到霉菌的數量遠不及其他霉菌染色多;(2)在常規染色中,有3例未找到霉菌的切片,做了霉菌染色即能證實有霉菌存在,如1例皮膚燒傷的病例,臨床懷疑有霉菌感染,常規染色不能找到霉菌,而霉菌染色證實有毛霉菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素后死亡,腎臟有一膿腫,內有多核巨細胞,不象化膿性細菌感染。曾疑為霉菌所致,常規染色未能找到霉菌,經霉菌染色后,證實膿腫內有念珠菌。存在另1例致死性中線肉芽腫患者,用了激素等治療后,肺內有念珠菌\曲霉菌及毛霉菌混合感染,死于十二指腸降部穿孔,穿孔部有壞死及炎癥,疑為霉菌所致,但切片曾多處會診,均因找不到霉菌而不能肯定.這次做霉菌染色,在穿孔邊緣及壞死區有少數念珠菌,肯定是霉菌感染所致的穿孔;(3)常規染色能見到霉菌數量少,且易與其他組織結構混淆,造成分類錯誤或遺漏,經霉菌染色糾正分類錯誤或遺漏的有7例,多數是毛霉菌與念珠菌混淆。有1例肺內常規染色僅見到多數孢子,未見菌絲,當時不能分類,只能診斷酵母菌類霉菌感染,經霉菌染色后,發現有菌絲存在,只不過量少而已,而改正為念珠菌感染。
   
  1年后,重新觀察切片時,常規染色及Grocott-Gomori氏洛托品*染色均無褪色,其他染色均有不同程度的褪色。淡綠對比染色幾乎*褪色。    

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