馬免疫球蛋白E（IgE）酶聯(lián)免疫試劑盒
在ELISA實(shí)驗(yàn)前的注意事項(xiàng)
1 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)
2 確定試劑盒在有效期內(nèi)
3 按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
4 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存
5 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等
6 根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
7 按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑
DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技術(shù)指南
8 選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
9 ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
10 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
11 一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
12 為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
13 若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
14 當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.
每個(gè)試劑盒操作是不同的，請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)操作。具體事項(xiàng)請(qǐng)
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