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雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)48T/96T

品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所在地上海市

更新時(shí)間:2017-09-11 20:56:00瀏覽次數(shù):406次

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雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒
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雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒

  ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。   

 

(一) 原理

  ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。   

ELISA檢測(cè)試劑盒組成:

1:濃縮洗滌液(50ml20x

2.標(biāo)本稀釋液(12ml

3.終止液(12ml

4.標(biāo)準(zhǔn)品(2管)

5.酶標(biāo)抗體稀釋液體(12ml

6.*抗體稀釋液(12ml

7.包被酶標(biāo)板一塊

8.坐標(biāo)紙一張

9.封板紙一張

樣品類型(SAMPLE TYPES):

   標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測(cè)種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

   標(biāo)本處理:

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加*。

   ◇血清:

室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

   ◇血漿:

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 2.0%EDTA.Na2 混合10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。

   ◇尿液、胸腹水、腦脊液:

用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

   ◇細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí),用 PBS PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 /ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

   ◇組織標(biāo)本:

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml Aprotinin *)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

   檢測(cè)原理:

采用雙抗體夾心ABC-ELISA

保存溫度:2-8℃保存6個(gè)月.

注意事項(xiàng):

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在 4 備用,如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在 -20 -70 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 可保存 48 小時(shí), -20 可保存 1 個(gè)月。 -70 度可保存 6 個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加*。

   備注:以上為ELISA試劑盒通用說明書,不包括特別的試劑盒,具體的請(qǐng)參照每個(gè)產(chǎn)品的說明書

 

 

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