犬瘟熱病毒（CDV）酶聯免疫（ELISA）
                                           試劑盒使用說明書
 

本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：犬瘟熱病毒（CDV）酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒定性測定犬血液、或其它相關組織中瘟熱病毒（CDV）
實驗原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中犬瘟熱病毒（CDV）。用純化
的犬瘟熱病毒（CDV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中犬瘟熱病毒（CDV）相結合，
經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的瘟熱病毒（CDV）抗體結合，形成抗
原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉
化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD
值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中犬瘟熱病毒（CDV）的存在與否。

試劑盒組成：
1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1/瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 
6 顯色劑B液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 個

標本要求：
1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測
2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，
但應避免反復凍融。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。  
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
   臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
   陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為犬瘟熱病毒（CDV）陰性
   陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為犬瘟熱病毒（CDV）陽性

注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須
注意安全。
規格：
     96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月