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上海天齊生物科技有限公司
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閱讀:318發布時間:2012-8-21
Caspase是一組天冬氨酸(FMOC-L-天冬氨酸)特異的半*蛋白酶,它們在凋亡中發揮重要作用。一般來說,哺乳動物的caspase可根據功能分類:細胞因子激活(包括caspases 1、4、5、13);凋亡起始(包括caspases 2、8、9、10)和凋亡執行(包括caspases 3、6、7)。 市場上有很多caspase檢測試劑盒,來檢測多種caspase的活性。我們既可以通過熒光標記的底物來檢測有活性的caspase,也可以利用熒光標記的caspase抑制劑來標記。你還可以通過免疫組化分析來檢測切割的底物如PARP。當然,很多公司也有caspase的抗體,但操作流程長,也不能對活細胞進行成像。
為此,Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent,以檢測凋亡時的Caspase 3/7活性。這是一種四個氨基酸(L-初油氨基酸)的肽段(DEVD),帶有核酸結合染料。大家都知道,DEVD肽段是Caspase 3/7的底物。CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent本身不發熒光,因為DEVD肽段抑制了染料與DNA的結合。然而,當凋亡細胞中的Caspase-3⁄7激活后,DEVD肽段被切割,讓染料與DNA結合,并發出明亮的綠色熒光。染料與DNA結合后的發射波長為~530 nm,可利用標準的FITC濾光片觀察。
與其他方法相比,這種試劑的檢測要簡單得多。只需將經過稀釋的檢測試劑加入細胞,孵育30分鐘,即可觀察。Caspase-3⁄7激活的凋亡細胞將有著明亮的綠色細胞核,而未激活細胞的熒光信號極低。這種分析實現了活細胞內Caspase-3⁄7激活的觀察。此外,由于檢測中無需洗滌步驟,故避免了洗滌所造成的細胞損失。更重要的是,CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent的信號可耐受固定和透化。這允許了后續開展終點分析,或利用免疫細胞化學檢測其他目的蛋白。此試劑適用于成像、高內涵分析/篩選、高通量篩選和流式細胞儀。
傳統的凋亡研究大多是在單個時間點進行測定,然而,因為細胞是活體,其生物學和細胞進程是動態而非靜態的,故記錄細胞應答某些刺激(如藥物處理或某種生長因子刺激)時所產生的動態變化可能更為關鍵。羅氏應用科學部推出的xCELLigence系統則為凋亡通路的全盤觀察打開了大門,讓我們能夠更深入地了解細胞中究竟發生了什么。xCELLigence是一種無需標記、同時又可對細胞進行實時監測的新型細胞分析平臺。它利用檢測電子傳感器阻抗變化以反映細胞生理狀態,從而對細胞進行無損傷地實時定量檢測。細胞接種在96微孔E-plate中,在每個孔的底部有嵌入的微電子感應器。使用低電壓(20mV)交流電在孔內產生一個離子環境,就能反映出細胞增殖、存活、凋亡、形態變化等細胞生物學狀態。
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