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上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
閱讀:426發(fā)布時(shí)間:2011-4-13
(1) 先分離膜,然后提取;如選用冷熱交替法、反復(fù)凍融法、超聲破碎法、玻璃勻漿法、自溶法和酶處理法使得細(xì)胞破碎,然后通過剃度離心得到含有膜蛋白的粗組分。
(2 )用特殊的去污劑選擇性的分離。 從膜上提取蛋白有許多困難.在多數(shù)情況下,都是采用去垢劑將疏水蛋白從其膜結(jié)構(gòu)中溶解下來,然后將蛋白質(zhì)穩(wěn)定.去垢劑的選擇通常是依據(jù)他對所需要蛋白質(zhì)的提取效率來確定,但在某些情況下,還要考慮到以后的純化步驟.雖然許多膜蛋白必須在去垢劑存在的情況下進(jìn)行純化,但zui終仍可能需要除去去垢劑.這常常會引起蛋白質(zhì)失活,但如果蛋白質(zhì)是用于測序的,他將不是一個(gè)問題.如果不是用于測序的,可考慮使用能夠黏附去垢劑的疏水珠.許多文獻(xiàn)和生化試劑供應(yīng)商的產(chǎn)品目錄中,都介紹有許多種不同的可用來溶解膜蛋白的去垢劑.然而,他們并不是普遍適用的.在設(shè)計(jì)膜蛋白溶解方案時(shí),必須考慮某一去垢劑的特殊性質(zhì).如 triton X-100在280nm處有吸收,如果某蛋白質(zhì)的測試與280nm處的吸收有關(guān),就應(yīng)避免使用這類去垢劑.
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