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技術(shù)文章

間接放射免疫法檢測(cè)跨膜型腫瘤壞死因子（TNF）

閱讀：517發(fā)布時(shí)間：2012-7-7

1． 材料
① 1％多聚甲醛；
② 3％牛血清白蛋白（BSA），溶于PBS；
③ 兔抗TNF的抗血清；
④ “I標(biāo)記的驢抗兔IgC抗體。

2．操作步驟
（1）將105巨噬細(xì)胞／fL用1％多聚甲醛固定于PVC板。
（2）用PBS洗去多余甲醛。
（3）加3％BSA，37cC孵育1h，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。
（4）棄上清，加1：50稀釋的兔抗TNF血清，以免疫前兔血清為對(duì)照，37~C孵育45min。
（5）用PBS洗三次，以去除未結(jié)合的抗體。
（6）加入125I標(biāo)記的驢抗兔IgC抗體（2 000cpm／孔），37C，孵育45min。
（7）用PBS充分洗板后，卜計(jì)數(shù)儀測(cè)量放射活性。


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