吸附劑、溶劑與被分離物性質(zhì)的關(guān)系：液一固吸附層析是運(yùn)用較多的一種方法,特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于1,000的低揮發(fā)性樣品）的分離,尤其是脂溶性成分一一般不適用于高分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水住化合物等的分離.吸附層析的分離效果,決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質(zhì)這三個因素.
1、吸附劑：
常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等.
（1） 硅膠
層析用硅膠為一多孔性物質(zhì),分子中具有硅氧烷的交鏈結(jié)構(gòu),同時在顆粒表面又有很多硅醇基.硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量多少有關(guān).硅醇基能夠通過氫鍵的形成而吸附水分,因此硅膠的吸附力隨吸著的水分增加而降低.若吸水量超過17％,吸附力極弱不能用作為吸附劑,但可作為分配層析中的支持劑.對硅膠的活化,當(dāng)硅膠加熱至100～110℃時,硅膠表面因氫鍵所吸附的水分即能被除去.當(dāng)溫度升高至500℃時,硅膠表面的硅醇基也能脫水縮臺轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩跬殒I,從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往,就不再有吸附劑的性質(zhì),雖用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性.所以硅膠的活化不宜在較高溫度進(jìn)行（一般在170cC以上即有少量結(jié)合水失去）.
硅膠是一種酸性吸附劑,適用于中性或酸性成分的層析.同時硅膠又是一種弱酸性陽離子交換劑,其表面上的硅醇基能釋放弱酸性的氫離子,當(dāng)遇到較強(qiáng)的堿注化臺物,則可因離子交換反應(yīng)而吸附堿性化合物.
（2）氧化鋁
氧化鋁可能帶有堿性（因其中可混有碳酸鈉等成分）,對于分離一些堿性中草藥成分,如生物堿類的分離頗為理想.但是堿性氧化鋁不宜用于醛、酮、醋、內(nèi)酯等類型的化合物分離.因?yàn)橛袝r堿性氧化鋁可與上述成分發(fā)生次級反應(yīng),如異構(gòu)化、氧化、消除反應(yīng)等.除去氧化鋁中絢堿性雜質(zhì)可用水洗至中性,稱為中性氧化鋁.中性氧化鋁仍屬于堿性吸附劑的范疇,本適用于酸性成分的分離.用稀硝酸或*處理氧化鋁,不僅可中和氧化鋁中含有的堿性雜質(zhì),并可使氧化鋁顆粒表面帶有NO3一或CI一的陰離子,從而具有離于交換劑的性質(zhì),適合于酸性成分的層析,這種氧化鋁稱為酸性氧化鋁.供層析用的氧化鋁,用于拄層析的,其粒度要求在100～160目之間.粒度大子100目,分離效果差：小于160目,溶濃流速大慢,易使譜帶擴(kuò)散.樣品與氧化鋁的用量比,一般在1：20～50之間層析柱的內(nèi)徑與柱長比例在1：10-20之向.
在用溶劑沖洗柱時,流速不宜過快,洗脫液的流速一般以每半～1小時內(nèi)流出液體的毫升數(shù)與所用吸附劑的重量（克）相等為合適.
（3）活性炭
是使用較多的一種非極性吸附劑.一般需要先用*洗滌,其次用乙醇洗,再以水洗凈,于80℃干燥后即可供層析用.層析用的活性炭,選用顆粒活注炭,若為活性炭細(xì)粉,則需加入適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱,以免流速太慢.活性炭主要且于分離水溶性成分,如氨基酸、糖類及某些甙.活性炭的有為吸附作用,在水溶液中zui強(qiáng),在有機(jī)溶劑中則較低弱.故水的洗脫能力zui弱,而有機(jī)溶劑則較強(qiáng).例如以醇-水進(jìn)行洗脫時,則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加.活性炭對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物,對大分子化合物的吸附力大于小分子化合物.利用這些吸附性的差別,可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開,單糖與多糖分開,氨基酸與多肽分開.
2、溶劑
層析過程中溶劑的選擇,對組分分離關(guān)系極大.在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑,用于薄層或紙層析時常稱展開劑.洗脫劑的選擇,須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時,當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì),一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分,則須選用極性溶劑為洗脫劑.如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或*代替硅膠）,則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低.
在柱層操作時,被分離樣品在加樣時可采用于法,亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入.溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的,以便被分離的成分可以被吸附.然后漸增大溶劑的極性.這種極性的增大是一個十分緩慢的過程,稱為“梯度洗脫”,使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫.如果極性增大過訣（梯度太大）,就不能獲得滿意的分離.溶劑的洗脫能力,有時可以用溶劑的介電常數(shù)（ε）來表示.介電常數(shù)高,洗脫能力就大.以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑,如硅膠、氧化鋁.對非極性吸附劑,如活性炭,則正好與上述順序相反,在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用,較在脂溶性溶劑中為強(qiáng).
3、被分離物質(zhì)的性質(zhì)
被分離的物質(zhì)與吸附劑,洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個要素,彼此緊密相連.在的吸附劑與洗脫劑的條件下,各個成分的分離情況,直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān).對極性吸附劑而言,成分的極性大,吸附住強(qiáng).
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