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技術(shù)文章

IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定

閱讀:701發(fā)布時間:2012-5-26

IL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用,其拮抗程度與IL-4濃度相關(guān),據(jù)此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。

(1)取生長良好的L929細胞傾去培養(yǎng)液,加入0.25%*消化后,充分洗滌細胞,調(diào)整細胞濃度至1×105—3×105/mL,每孔加1001~L,37℃,5%C02溫箱中培養(yǎng)24h。

(2)采用9—10日齡雞胚,制備成纖維細胞單層培養(yǎng),接種適量VSV病毒。當(dāng)細胞病變達+++—++++時,收獲病毒,并進行病毒TCID50測定。

(3)將待檢上清和rlL-4分別與4U/mL IFN混合,在L929細胞培養(yǎng)孑L內(nèi)加100/zL。37~C,5%c02溫箱中孵育24h。

(4)VSV攻擊:每孔加100uL病毒懸液,含200TCIDso;置37~C,5%C02溫箱培養(yǎng)48h,待病毒對照孔病變達+++—++++,細胞對照正常時,測定結(jié)果。

(5)將培養(yǎng)液全部倒出,用Hanks液洗3次;每孔加入100bL0.5%結(jié)晶紫染色液,染10—20rain棄去,Hanks液洗3次,加入95%酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右,待細胞內(nèi)染料*溶解。用分光光度計540nm波長測OD值,以準確客觀地反映細胞存活數(shù)量。

(6)注意事項:①L929細胞在營養(yǎng)條件不良時,可呈圓形漂浮狀,此時更換培養(yǎng)液可使其恢復(fù)為梭形貼壁細胞;②L929細胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中,否則可能造成某個部位細胞過密,另一部分過稀,將影響細胞單層的形成。


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