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堿性磷酸酶用于ELISA的標(biāo)記用酶

閱讀：485發(fā)布時(shí)間：2011-11-2

堿性磷酸酶為二聚體蛋白，是一種含鋅的金屬酶，每分子酶至少含2個(gè)Zn原子。酶上3類(lèi)金屬結(jié)合位點(diǎn)，即所謂的催化（A）、結(jié)構(gòu)（B）和調(diào)節(jié)（C）位點(diǎn)，兩個(gè)A位點(diǎn)的結(jié)合則只會(huì)導(dǎo)致一個(gè)亞單位的磷酸化，即負(fù)協(xié)作亞單位相互作用（negativecooperativesubunitinteraction），而當(dāng)加入金屬離子（例如Mg2+）結(jié)合B和C位點(diǎn)時(shí)，上述負(fù)協(xié)作亞單位相互作用即隨之消除，2個(gè)亞單位都被磷酸化。每個(gè)亞單位Znz+結(jié)合于3個(gè)不同的*殘基，其中至少1個(gè)位于A位點(diǎn)。

堿性磷酸酶用于ELISA必須注意的是含磷酸鹽的緩沖液對(duì)其酶活性的抑制作用，因?yàn)樵贓LISA中所使用的溫育和洗滌緩沖液一般均為磷酸鹽緩沖液生理鹽水（PBS），含有相對(duì)高濃度的磷離子（15retool／L），對(duì)堿性磷酸酶有很強(qiáng)的抑制作用，盡管zui后顯色反應(yīng)的底物在另一種緩沖液中，但前面PBS洗板所殘留的PBS，足以抑制約一半的酶活性。因此如試劑盒標(biāo)記用酶為堿性磷酸酶，則溫育和洗滌緩沖液不能使用PBS溶液。



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