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吸附法分離與純化蛋白質

閱讀:780發布時間:2011-7-30

在蛋白質的提純方法中,選擇性吸附也是應用歷史較久迄今仍在廣泛采用的方法之一。早期工作常用高嶺土(我國的一種土質,其分子式大致是AL2O3•2SiO2•2H2O)、氧化鋁(AL2O3)及活性炭等吸附劑,由于這些吸附劑吸附力較弱,或者易引起蛋白質變性而應用不廣,現已為凝膠性吸附劑所代替,如*凝膠和磷酸鈣凝膠,尤其后者使用zui廣。

吸附劑的應用有兩種不同方式。當蛋白質較易吸附時,可以選擇適當條件主要吸附蛋白質而分離去雜質;當蛋白質較難吸附時,則選擇利于吸附雜質條件將雜質與蛋白質分開。有時兩種方法可先后使用,以達到較高的提純目的。吸附條件通常在微酸性條件(pH5~6)及稀鹽溶液中進行,鹽濃度過高會干擾對蛋白質及酶的吸附,亦即是說需要用更多量的吸附劑才能達到一定結果。洗脫時一般在弱堿條件下或適當提高洗脫液離子強度,可將吸附的蛋白質或酶*洗脫下來。

  吸附操作可以用靜態吸附,也可以用柱層析吸附,即將凝膠裝成柱進行吸附操作。凝膠裝柱后如溶液的通過能力很差,可用助濾劑(如硅藻土)和凝膠混合,當調整二者的比例時得到一系列通過能力和吸附能力不同的層析柱。zui近還使羥基磷灰石[Ca10(PO4)6.(OH)2]分離蛋白質和酶,它可以在高鹽濃度下吸附中性及酸性蛋白質而排除堿性蛋白質。吸附常在pH6.8的磷酸緩沖液中進行。洗脫*時凝膠可反復使用3~4次,吸附雜質較多的凝膠以0.1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸洗凈后再用。
 


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