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技術(shù)文章

吸附法分離與純化蛋白質(zhì)

閱讀:783發(fā)布時(shí)間:2011-7-30

在蛋白質(zhì)的提純方法中,選擇性吸附也是應(yīng)用歷史較久迄今仍在廣泛采用的方法之一。早期工作常用高嶺土(我國(guó)的一種土質(zhì),其分子式大致是AL2O3•2SiO2•2H2O)、氧化鋁(AL2O3)及活性炭等吸附劑,由于這些吸附劑吸附力較弱,或者易引起蛋白質(zhì)變性而應(yīng)用不廣,現(xiàn)已為凝膠性吸附劑所代替,如*凝膠和磷酸鈣凝膠,尤其后者使用zui廣。

吸附劑的應(yīng)用有兩種不同方式。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)較易吸附時(shí),可以選擇適當(dāng)條件主要吸附蛋白質(zhì)而分離去雜質(zhì);當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)較難吸附時(shí),則選擇利于吸附雜質(zhì)條件將雜質(zhì)與蛋白質(zhì)分開(kāi)。有時(shí)兩種方法可先后使用,以達(dá)到較高的提純目的。吸附條件通常在微酸性條件(pH5~6)及稀鹽溶液中進(jìn)行,鹽濃度過(guò)高會(huì)干擾對(duì)蛋白質(zhì)及酶的吸附,亦即是說(shuō)需要用更多量的吸附劑才能達(dá)到一定結(jié)果。洗脫時(shí)一般在弱堿條件下或適當(dāng)提高洗脫液離子強(qiáng)度,可將吸附的蛋白質(zhì)或酶*洗脫下來(lái)。

  吸附操作可以用靜態(tài)吸附,也可以用柱層析吸附,即將凝膠裝成柱進(jìn)行吸附操作。凝膠裝柱后如溶液的通過(guò)能力很差,可用助濾劑(如硅藻土)和凝膠混合,當(dāng)調(diào)整二者的比例時(shí)得到一系列通過(guò)能力和吸附能力不同的層析柱。zui近還使羥基磷灰石[Ca10(PO4)6.(OH)2]分離蛋白質(zhì)和酶,它可以在高鹽濃度下吸附中性及酸性蛋白質(zhì)而排除堿性蛋白質(zhì)。吸附常在pH6.8的磷酸緩沖液中進(jìn)行。洗脫*時(shí)凝膠可反復(fù)使用3~4次,吸附雜質(zhì)較多的凝膠以0.1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸洗凈后再用。
 


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