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技術文章

溶解細菌細胞壁之*的測定

閱讀:1501發布時間:2011-6-14

*為正常機體免疫防御機制的組成部分,因具有溶解細菌細胞壁的作用而得名。在人體內,它存在于嗜中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞內;也存在于粘膜分泌液中,成為體表防御因素之一。體內多數器官含有一定濃度的*,但腎臟和脾臟的含量較多。單核細胞與巨噬細胞的*位于細胞表面,故其釋放活躍,而嗜中性粒細胞的*位于胞漿深層,只在細胞裂解時才釋放出來。正常人尿中無*。某些疾病患者血清或體液內的*活性值有顯著差別,故測定*日益受到臨床重視。

1.原理 根據*能使革蘭陽性菌細胞壁溶解,尤其是對腐生菌,如溶壁微球菌(M.1ysodeikticus)zui為敏感,故常以溶解溶壁微球菌為指標,對*的活性值進行測定。常用的方法有瓊脂平板法與比濁法。新近還根據免疫擴散法中抗原抗體反應的原理而建立了*免疫測定法,由測酶活性改測酶含量,初步探討認為此法具有特異、靈敏、準確等優點。現將三種方法分別介紹如下。

2.實驗方法
(1)瓊脂平板法 用0.067mol/L,pH6.4 PBS將瓊脂配成1%濃度,加溫溶解后加50mg/100mL溶壁微球菌菌粉混合制成平皿,凝固后打成直徑2mm的小孔。分別加*標準應用液及標本20gL,置37℃擴散18h,用卡尺測溶菌區域直徑,根據標準液濃度和溶菌環直徑用半對數表制成檢量線,查標準曲線求檢品*活性值。

(2)比濁測定法 取*標準應用液(5、10、15、20、50ug/mL)及標本各0.1mL分加至試管,每管加基質液6mL(溶壁微球菌基質液240mg/L)混勻,置37℃水浴10min,立即混懸,用600mn波長測A值,以溶壁微球菌濁度的變化在標準曲線上查出*的活性
值。

(3)免疫測定法 ①免疫單擴散板制備:將單價特異性兔抗人*抗體加入1%瓊脂糖液中(50℃),制成含5%抗血清凝膠板,用打孔器打成直徑為3mm的小孔,當天使用;②*免疫測定:將10btL標本加于免疫擴散板的小孔中,保持濕度在室溫下反應,當沉淀環達zui大限度后,用帶測微計的放大鏡讀其直徑,以直徑的平方在標準曲線上查出*的相應濃度;③標準曲線制備:取*lmg溶于0.05mol/L,pH6.4PBSlmL中,配制成5、10、20、40、80、100、200、300/lS/mL 8種濃度,分別加人免疫擴散板小孔中,經反應后,以沉淀環直徑的平方為橫坐標,*濃度為縱坐標,繪制標準曲線。

3.正常參考值與臨床意義 正常人尿液和腦脊液(CSF)中*為0;血清中*正常參考值:比濁法為11.80±2.2mz/L;平板法為20.40±2.70mg/L;免疫測定法為10—40mz/L(X±2S)。由于方法與實驗條件不同,測定結果有差別,故各實驗室應建立自己的正常參考值。

血清*測定對鑒別各型急性白血病有一定意義。急粒及急單血清*升高;而急淋、急性紅白血病降低或正常;經*奏效病情緩解后,*水平可恢復。血清*測定可作為判斷局限性腸炎活動性的一個有用的指標,并且有助于判斷臨床過程的嚴重程度和對治療的反應。

尿內*含量增高的原因有:①腎小管損害;②高*血癥;③腎組織破壞。臨床上測定尿*主要是作為腎小管損害的一個指標,各種原因的腎小管損害都可引起尿*含量增高。腎移植病人定期檢查尿*活性十分必要,如移植腎接受良好,則*活性在7d內恢復正常;若尿中過多的*持續存在,必須疑及排斥反應的發生。

細菌性腦膜炎患者CSF*含量遠較病毒性腦膜炎患者的含量高,因此,CSF*測定對二者的鑒別有重要意義。此外,CSF*測定對中樞神經系統的原發性或繼發性腫瘤有一定輔助診斷價值。


 


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